小尾寒羊高繁殖力候选基因的研究

论文摘要

本研究以性早熟、高繁殖力绵羊（Ovis aries）品种（湖羊和小尾寒羊）和性晚熟、低繁殖力品种（白萨福克、中国美利奴和特克塞尔等）为试验材料，采用限制性片段长度多态（RFLP）和序列分析等方法研究GDF9、VEGF和PROP1候选基因的遗传变异，并分析这些基因对绵羊高繁殖力性状的影响，寻找影响小尾寒羊性早熟和高繁殖力的主效基因或有较大关联的基因型或遗传标记，以探索小尾寒羊高繁殖力和性早熟的分子遗传机理，为绵羊高繁殖性能的标记辅助选择提供科学依据。1、对GDF9基因外显子2的研究表明：在所研究的11个绵羊品种中均不存在FecTT突变。2、对VEGF基因，结果表明：只有外显子6和部分内含子5的（引物B5）扩增片段存在PCR-RFLP多态性，对于VEGF基因内含子5的14752位C→T的突变，在小尾寒羊（n=244）和湖羊（n=57）中检测到3种基因型CC、CT和TT，在白萨福克（n=58）和中国美利奴（n=41）中检测到2种基因型CC和CT。TT型小尾寒羊产羔数分别比CT和CC型多0.7（P<0.05）只和1.05只（P<0.05），CT型小尾寒羊产羔数比CC型的多0.35只（P<0.05）。VEGF基因内含子5的14758位的G→T的突变，在小尾寒羊（n=241）、湖羊（n=57）和中国美利奴（n=41）中检测到2种基因型GG和GT，在白萨福克（n=59）中只检测到GG型。小尾寒羊GG和GT基因型之间产羔数最小二乘均值差异不显著（P>0.05）。VEGF基因外显子6的14908位C→T的突变，在小尾寒羊（n=246）、湖羊（n=57）和中国美利奴（n=41）中检测到3种基因型CC、CT和TT，在白萨福克（n=59）中检测到2种基因型CT和TT，小尾寒羊CC、CT和TT基因型之间产羔数最小二乘均值差异均不显著（P>0.05）。3、对PROP1基因，结果表明：只有内含子1的（引物C5）扩增片段存在PCR-RFLP多态性，对于PROP1基因内含子1的330位的C→T的突变，在小尾寒羊（n=245）、湖羊（n=56）和特克塞尔（n=58）中检测到CC、CT和TT3种基因型，在白萨福克（n=56）中检测到CC和CT2种基因型。TT型和CT型小尾寒羊产羔数分别比CC型多0.83只（P<0.05）和0.47只（P<0.05），TT型和CT型之间差异不显著（P>0.05）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 略词语表（Abbreviation）
• 绵羊繁殖力的研究进展
• 1 国内外研究现状
• 2 绵羊多胎主基因的研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试样本采集
• 2.1.2 菌株和载体
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.1.5 分析工具软件
• 2.1.6 溶液试剂配制
• 2.2 羊血 DNA 的提取及检测
• 2.2.1 血液 DNA 的提取步骤
• 2.2.2 DNA 浓度和纯度的检测
• 2.2.3 引物设计
• 2.2.4 PCR 扩增
• 2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测
• 2.3 RFLP 分析
• 2.3.1 RFLP 分析
• 2.3.2 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测
• 2.3.3 NaCO3染色方法
• 2.4 绵羊 VEGF 基因部分序列克隆和测序
• 2.4.1 PCR 产物的纯化
• 2.4.2 连接反应
• 2.4.3 感受态细胞的制备---氯化钙法
• 2.4.4 转化
• 2.4.5 克隆产物快速检测方法
• 2.4.6 测序
• 2.5 群体遗传学研究方法
• 2.5.1 基因频率
• 2.5.2 基因型频率
• 2.5.3 群体杂合度
• 2.5.4 多态信息含量
• 2.5.5 群体 Hardy-Weinberg 平衡检测
• 2.5.6 基因型与产羔数的关联分析
• 3 结果与分析
• 3.1 绵羊 GDF9 基因的 SNPs 及其与产羔数的关联性
• 3.1.1 GDF9 基因外显子 2 的 PCR 扩增
• 3.1.2 GDF9 基因外显子 2 的 PCR-RFLP 分析
• 3.2 绵羊 VEGF 基因的 SNPs 及其与产羔数的关联性
• 3.2.1 VEGF 基因的 PCR 扩增
• 3.2.2 PCR-RFLP 分析
• 3.2.3 不同绵羊品种 VEGF 基因的基因型频率和等位基因频率分析
• 3.2.4 VEGF 基因不同基因型小尾寒羊的产羔数
• 3.3 绵羊 PROP1 基因的 SNPs 及其与产羔数的关联性
• 3.3.1 PROP1 基因的 PCR 扩增
• 3.3.2 PCR 扩增片段序列分析
• 3.3.3 C5 的 PCR 扩增
• 3.3.4 PCR-RFLP 分析
• 3.3.5 不同绵羊品种 PROP1 基因的基因型频率和等位基因频率分析
• 3.3.6 PROP1 基因不同基因型小尾寒羊的产羔数
• 4 讨论
• 4.1 样本的采集
• 4.2 群体遗传结构
• 4.3 关于绵羊 GDF9、VEGF、PROP1 基因多态性的分析
• 4.3.1 绵羊 GDF9 基因的多态性
• 4.3.2 绵羊 VEGF 基因的多态性
• 4.3.3 绵羊 PROP1 基因的多态性
• 4.4 关于 GDF9、VEGF、PROP1 基因与绵羊繁殖的关系
• 4.4.1 GDF9 基因突变与绵羊繁殖的关系
• 4.4.2 VEGF 基因突变与繁殖的关系
• 4.4.3 PROP1 基因突变与繁殖的关系
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介