论文摘要
目的:检测抑癌基因P53（突变型）、GST-π、MDR1在卵巢癌中的表达,并将测定结果结合卵巢癌临床参数如临床分期、病理类型、化疗耐药、化疗史等进行比较,了解P53、GST-π、MDR1在卵巢癌中的表达及其生物学行为、预后的关系;在体外细胞水平从细胞凋亡角度探讨卵巢癌多药耐药的发生机制,进一步阐明卵巢癌中细胞凋亡相关基因P53的突变与耐药基因的关系,探讨卵巢癌耐药的机理,为指导临床选择合适的治疗方案、判断预后以及寻找有效的逆转肿瘤耐药的方法提供理论依据。方法:1.采用RT-PCR法及SP免疫组化法检测60例不同性质卵巢组织中耐药基因MDR1、GST-π、P53mRNA及其蛋白P-gP、GST-π、P53的表达水平。2.采用MTT法检测不同浓度DDP对COC1及COC1/DDP细胞的抑制作用。流式细胞仪检测不同浓度DDP作用COC1及COC1/DDP细胞后的凋亡变化。3.RT-PCR半定量法测定不同浓度DDP作用于COC1及COC1/DDP细胞24h后P53、GST-π、MDR1mRNA含量的变化。结果:1.上皮性卵巢癌,良性上皮性肿瘤,正常卵巢组织中三种指标的表达情况:MDR1蛋白依次为9/22、0/20、0/18,GST-л蛋白为16/22、0/20、0/18,p53蛋白为14/22、0/20、0/18;MDR1mRNA依次为12/22、0/20、0/18,GST-πmRNA为17/22、3/20、0/18,p53mRNA为16/22、0/20、0/18,三个指标在上皮性卵巢癌中的表达率显著增高;化疗耐药与MDR1和GST-π相关; P53表达与肿瘤分期和组织分化程度相关;MDR1表达与组织分化程度相关; p53与MDR1表达具有一定相关性。2.不同浓度DDP处理COC1及COC1/DDP细胞后,均有抑制细胞生长及促凋亡作用,且呈时间和剂量依耐性。DDP浓度在2.5～10μg/mL内,敏感细胞株凋亡率明显高于耐药细胞株,差异具有显著性意义（P<0.05）。3.COC1细胞中GST-π、P53mRNA呈弱表达,不同浓度DDP作用24h后,P53、GST-л表达明显减弱,且呈浓度依耐性,MDR1未见表达;COC1/DDP细胞中P53、MDR1mRNA表达较COC1细胞增强,GST-πmRNA变化不明显,不同浓度DDP作用后三者变化无显著性差异。结论:1. P53、GST-π、MDR1在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及卵巢癌中表达逐渐增强,提示三者均参与卵巢癌的形成,并与耐药有关。卵巢癌化疗耐药与耐药基因GST-π、MDR1过表达及细胞凋亡相关基因P53突变密切相关,突变的P53可能通过调控耐药基因GST-π、MDR1而间接发挥其耐药作用。2. P53蛋白表达与卵巢上皮性肿瘤的良恶性、肿瘤细胞的分化程度、患者的临床分期有关,与恶性肿瘤的病理类型无关。P53蛋白表达可作为卵巢癌预后与耐药的一个指标。3.GST-π、MDR1基因表达与卵巢癌化疗具有一定的相关性,在卵巢癌化疗耐药组GST-π、MDR1基因表达增高。因此在判断临床用药时检测多药耐药相关基因的表达,可得到一定的耐药信息,有助于临床化疗方案的制定。p53的表达与MDR1阳性率存在一定的相关性,卵巢癌耐药可能与细胞凋亡相关。4.不同浓度DDP可抑制COC1、COC1/DDP细胞增殖,并且具有时间-剂量依耐性。DDP对COC1细胞作用更明显。5.诱导细胞凋亡是顺铂作用机制之一,顺铂可诱导卵巢癌COC1、COC1/DDP细胞凋亡,获得性耐药与肿瘤细胞凋亡有关。6. COC1/DDP细胞中P53、MDR1表达较COC1细胞增强,不同浓度DDP作用COC1细胞后,P53表达明显减弱,呈浓度依耐性,而作用COC1/DDP细胞后,P53变化无显著性。卵巢癌顺铂耐药的产生可能与凋亡途径的失活有关。卵巢癌中多药耐药现象常见,检测多药耐药相关基因MDR1、GST-π的表达对临床预测化疗药物的敏感性有较大的应用价值。凋亡相关基因P53（突变型）在人卵巢癌多药耐药细胞中高表达,是导致细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因。