药用石韦的孢子扫描电镜鉴定及黄酮化合物的组织化学定位和测定

论文摘要

石韦为水龙骨科(Polypodiaceae),石韦属(Pyrrosia Mirbel)多种植物,广布于东北、华北、华中、西北和西南各省区。其地上部分可作药用,味苦、甘,性微寒,具有利尿通淋、清肺止血的功效。2005年《中华人民共和国药典》将同属3种植物石韦[Pyrrosia lingua(Thunb.)Fatwell]庐山石韦[Pyrrosia sheareri(Bak.)Ching]和有柄石韦[Pyrrosia petiolosa(Christ)Ching]的干燥叶作为石韦药材使用,同属多种植物也在全国不同地区应用。为了使各种药源石韦易于区别,提供药材的亚显微结构资料,更有利于区分外观形态较相似的不同种石韦,对石韦的药材鉴定及质量控制是非常必要的。对中药石韦中的成分分析方法进行研究,并测定石韦中不同种、不同部位成分的含量,可为石韦药材的质量控制及合理使用提供化学依据。我们对5种药用石韦进行了较系统的研究,得到了以下结果:(1)利用扫描电镜对所采毡毛石韦Pyrrosia drakeana(Franch.)Ching、有柄石韦Pyrrosiapetiolosa(Christ)Ching、华北石韦Pyrrosia davidii(Bak.)Ching、石韦Pyrrosia lingua(Thunb.)Fatwell孢子的表面饰纹观察,为以后的药材鉴定提供了可靠的亚显微结构资料。(2)组织化学染色结果显示:药用石韦的黄酮类化合物基本分布于石韦药材叶的表皮、叶肉细胞以及星状毛;叶柄的皮层厚壁组织、髓细胞、维管束鞘及韧皮部;在根状茎中主要分布在表皮、髓细胞及韧皮部。在实际应用中,星状毛往往被弃而不用,这无形中损失了黄酮化合物提取的有效部位。(3)采用正交实验设计法,筛选优化提取参数,探究石韦总黄酮的提取工艺,并利用最佳提取工艺提取5种不同石韦材料总黄酮,采用分光光度法进行测定后加以比较。结果表明,5种药用石韦的叶总黄酮含量明显高于根状茎的黄酮含量。总黄酮含量由高到低依次为:毡毛石韦117.508mg/g,石韦药材103.449mg/g,有柄石韦97.576mg/g,石韦68.994mg/g,华北石韦53.548mg/g。不同种石韦总黄酮含量存在显著差别,提示不同种石韦可能具有不同的药用功效。所以把总黄酮作为石韦中药质量控制的指标成分之一,对不同种石韦分别制定评价标准,区别对待,是很有必要的。(4)利用薄层色谱及薄层扫描对5种石韦材料乙酸乙酯提取部位进行检测。结果显示,不同药用石韦所含的化学成分种类虽较相似,但也有一些差别。5种石韦样品中,地下部分均没有检测到槲皮素及山奈酚。只有毡毛石韦的地上部分含有槲皮素。另外,除华北石韦不含山奈酚外,其余材料均检测到了山奈酚。5种所测样品的叶中可能均有齐墩果酸的分布。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 石韦的研究进展
• 1.1.1 石韦概述
• 1.1.2 石韦的形态学研究
• 1.1.3 石韦的生长与繁殖
• 1.1.4 石韦分布调查
• 1.1.5 石韦药材的鉴别及质量控制研究
• 1.1.6 石韦化学成分及活性研究
• 1.2 扫描电镜的应用
• 1.2.1 扫描电镜的广泛应用
• 1.2.2 扫描电子显微镜在植物药研究中的应用
• 1.2.3 扫描电镜在孢粉学研究中的应用
• 1.3 黄酮类化合物研究中常用的研究方法
• 1.3.1 化合物的组织化学定位
• 1.3.2 黄酮类化合物的提取
• 1.3.3 黄酮类化合物的分离纯化
• 1.3.4 化合物的测定
• 1.4 本研究的目的意义
• 第2章 原药材的鉴定及孢子的扫描电镜观察
• 2.1 材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 形态鉴定结果
• 2.2.2 扫描电镜观察结果
• 2.3 分析与讨论
• 第3章 药用石韦黄酮类物质的组织化学定位
• 3.1 试验材料与试器
• 3.1.1 试验材料
• 3.1.2 试验试剂
• 3.1.3 实验仪器
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 冰冻切片改进技术
• 3.2.2 冰冻切片技术
• 3.3 试验结果
• 3.3.1 石韦的组织结构
• 3.3.2 石韦的组织化学显色
• 3.4 讨论
• 第4章 药用石韦总黄酮的提取及测定
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 试器与材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 总黄酮提取正交实验的结果与分析
• 4.2.2 不同石韦总黄酮含量比较
• 4.3 讨论
• 第5章 药用石韦化学成份——槲皮素、山奈酚及齐墩果酸的薄层色谱测定
• 5.1 试验的材料与试器
• 5.1.1 实验材料
• 5.1.2 试验试剂
• 5.1.3 试验器具及仪器
• 5.2 试验方法
• 5.2.1 样品制备
• 5.2.2 标品溶液的制备
• 5.2.3 薄层层析方法
• 5.2.4 薄层扫描方法
• 5.3 实验结果
• 5.3.1 展开剂的选择
• 5.3.2 显色剂的选择
• 5.3.3 不同石韦药材乙酸乙酯部位的薄层色谱
• 5.3.4 薄层扫描
• 5.4 结果讨论
• 第6章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读硕士学位期间科研成果