苦参碱、PD98059及U0126对肝癌MAPK、JAK-STAT信号转导通路的调控作用

论文摘要

目的:原发性肝癌是人类常见的恶性肿瘤之一,严重的危害我国人民的生命和健康。很多学者都致力于新型抗癌药物的研究,但到目前为止尚无实质性进展。因此寻找新的、有效的肝癌化学药物具有重要的临床意义。细胞信号转导在细胞生长调控中起重要作用,信号通路中任何组分的改变都会导致细胞增殖凋亡的失控,发生癌变。研究表明酪氨酸蛋白激酶信号转导系统在肿瘤发生发展中起重要作用,在肝癌细胞的信号转导链中涉及多种信号转导途径,起主要作用的有促进细胞增殖并调节基因转录的Ras/Raf/MAPK途径和调节效应基因转录的JAK-STAT途径。本研究利用苦参碱、MEK途径特异性抑制剂PD98059及U0126作用于肝癌SMMC-7721细胞株,研究PD98059、U0126及苦参碱对肝癌细胞的MAPK、JAK-STAT影响。方法:1 MTT法检测苦参碱、PD98059、U0126对肝癌SMMC-7721细胞株增殖的影响;2 RT-PCR法检测苦参碱、PD98059、U0126、苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126对肝癌SMMC-7721细胞erk、stat3、stat5、c-jun mRNA的影响;3 Western blotting法检测苦参碱、PD98059、U0126、苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126对肝癌SMMC-7721细胞ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达的影响;4激光共聚焦显微镜检测苦参碱、PD98059、U0126、苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126对肝癌SMMC-7721细胞ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达的影响。结果:1苦参碱、PD98059、U0126、苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126对肝癌SMMC-7721细胞株增殖影响情况苦参碱、PD98059、U0126能够抑制SMMC-7721细胞增殖,呈浓度-时间依赖性。PD98059或U0126与苦参碱联合应用48h后对细胞增殖的抑制率升高,与单独应用苦参碱48h相比无统计学意义（P >0.05）;与PD98059、U0126单用相比,抑制率显著上升（P <0.05）。2苦参碱、PD98059、U0126、苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126对肝癌SMMC-7721细胞erk、stat3、stat5、c-jun mRNA的影响苦参碱作用于肝癌SMMC-7721细胞后,erk、stat3、stat5、c-jun mRNA表达量均有明显下降,与对照组比较差异有显著性（P<0.05）。PD98059、U0126作用于SMMC-7721细胞48h后,erk、stat3、stat5 mRNA的表达量和对照组比较无显著差异。c-jun mRNA的表达量和用药前比较有显著差异（P <0.05）。苦参碱+ PD98059、苦参碱+ U0126组作用于SMMC-7721细胞48h后,erk、stat3、stat5、c-jun mRNA的表达量比对照组降低,差异有显著性（P<0.05）。与苦参碱组相比较,PD98059+苦参碱、U0126+苦参碱组erk、stat3、stat5、c-jun mRNA的表达量无显著差异（P>0.05）。与PD98059、U0126组比较,苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126组erk、stat3、stat5 mRNA的表达量显著降低（P<0.05）。3苦参碱、PD98059、U0126、苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126对肝癌SMMC-7721细胞ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达的影响苦参碱作用于肝癌SMMC-7721细胞48h后,ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达量均有下降,与对照组比较差异有显著性（P<0.05）。PD98059、U0126作用于SMMC-7721细胞48h后,P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达量比对照组显著降低（P<0.05）。苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126作用于SMMC-7721细胞48h后,ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达量和对照组比较显著降低（P<0.05）。与苦参碱组相比较,PD98059+苦参碱、U0126+苦参碱组ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达量无显著改变（P>0.05）。与PD98059、U0126组比较,苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126组ERK、STAT3、STAT5蛋白表达量显著降低（P<0.05）;P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达量无显著差异（P >0.05）。4激光共聚焦显微镜（LSCM）检测肝癌SMMC-7721细胞ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN蛋白表达的影响苦参碱作用于SMMC-7721细胞48h后,ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN抗体的荧光强度均较对照组降低,其中P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN更明显。PD98059、U0126组可见P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN抗体的荧光强度均较对照组降低,而ERK、STAT3、STAT5与对照组相比变化不明显。苦参碱+PD98059、苦参碱+U0126组ERK、STAT3、STAT5、P-ERK、P-STAT3、P-STAT5、C-JUN抗体的荧光强度均显著降低。结论:1 PD98059、U0126能有效抑制ERK、STAT3、STAT5蛋白激酶的磷酸化,降低C-JUN的表达,进而抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖。2苦参碱能下调肝癌细胞erk、stat3、stat5、c-jun mRNA表达水平,降低ERK、STAT3、STAT5蛋白激酶的磷酸化水平及下游信号C-JUN的表达,从基因转录和蛋白活化两个水平抑制MAPK、JAK-STAT通路及其下游信号的传递,从而抑制肿瘤细胞的增殖。3苦参碱能增强PD98059、U0126对肝癌细胞增殖的抑制,起增效作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 苦参碱、PD98059 及 U0126 对肝癌 MAPK、JAK-STAT 信号转导通路的调控作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 肿瘤的分子靶向治疗
• 致谢
• 个人简历