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猪β-连环素基因的分离，多态性检测及其与生产性状、生理生化指标的关联分析

2020-11-28阅读(859)

猪β-连环素基因的分离，多态性检测及其与生产性状、生理生化指标的关联分析

论文摘要

克隆出猪β-连环素基因片段,检测了该基因的组织表达谱。分析了不同群体中碱基突变位点的多态性,初步分析了该基因与部分生产性状和生理生化指标的关联性。对健康的通城（T）（n=33）、长白（L）（n=29）、大白（Y）（n=31）纯种猪以及长大通（LYT）（n=33）和大长通（YLT）（n=33）三元杂种猪的生理生化指标进行了对比研究。测定了五个群体猪血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHO）、尿素氮（BUN）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LCL-C）、肌酐（CRE）、K+、Cl-、Ca2+、三碘甲状腺原氨酸（T3）、四碘甲状腺原氨酸（T4）、促甲状腺素（TSH）、胰岛素（INS）、瘦素（leptin）、神经肽Y（NPY）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的含量,检测了通城猪与长白猪血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）的活性和血糖含量。并将上述生理生化指标与五个群体猪的生长、胴体与肉质性状进行了关联分析。结果如下:1.猪CTNNB1基因的克隆、组织表达、多态性检测与性状关联分析（1）依据人cDNA信息,应用生物信息学及比较基因组学策略,克隆出猪β-连环素基因片段,并获得猪β-连环素基因cDNA编码区全长序列。（2）利用RT-PCR法,检测了成年长白母猪心、肝、脾、肺、肾、背肌、心肌、脂肪、胃、大肠、小肠、卵巢、子宫、胸腺和淋巴十五种组织中CTNNB1基因的表达。结果表明,CTNNB1基因的不同转录本在不同组织中均有表达,并存在表达差异。（3）在CTNNB1的第3内含子的162位（G-A转换）和第9内含子的64位（G-C转换）发现了两个潜在的突变位点。分析了不同群体中碱基突变位点的多态性,计算了该位点在7个猪品种中的基因型和基因频率,比较了各基因型在不同猪群的分布差异。研究发现,该位点在国内外猪群体中具有丰富多态性。（4）研究了CTNNB1基因第3内含子的162位点和第9内含子的64位点的多态性,初步分析了该基因多态位点与部分生产性状和生理生化指标的关联性。结果表明,不同基因型个体的PLBH,MS,TP,TSH和leptin存在显著差异（P＜0.05）。2.血清激素含量测定结果在五个群体中,大长通血清总T3显著高于长白猪（P＜0.05）。通城猪血清总T4极显著高于其它群体（P＜0.01）。大白猪血清TSH极显著高于通城猪、大长通和长大通。五个群体中血清胰岛素含量差异不显著（P＞0.05）。大白猪血清IGF-1显著高于其它群体。五个群体中,通城猪血清瘦素最高,长大通最低,两者差异显著（P＜0.05）。长大通血清NPY显著高于大白猪和通城猪。3.血浆蛋白、尿素氮和肌酐含量测定结果在五个群体中,通城猪血浆TP最高,与其它猪群体差异极显著（P＜0.01）。大白猪血浆ALB最高,与长白猪和长大通差异显著（P＜0.05）。通城猪血浆球蛋白浓度与大白猪、长大通、大长通和长白猪差异显著。4.血清脂类物质和血浆脂蛋白含量测定结果在五个群体中,通城猪血清CHO显著低于其它群体（P＜0.05）。通城猪与大白猪血清TG显著低于长白猪、大长通和长大通（P＜0.05）。长白猪血清HDL-C显著低于通城猪和大长通（P＜0.05）。长大通血清LDL-C显著高于长白猪（P＜0.05）。大白猪血清Cr极显著高于其它群体（P＜0.01）,通城猪极显著低于其它群体（P＜0.01）。5.血液生理生化指标与生长性状的相关分析结果在5个群体中,血清CK与日增重呈低度正相关（P＜0.01）。血清ALP与达上市日龄呈低度正相关（P＜0.01）。血清肌酐与初生重和日增重呈显著正相关（P＜0.01）,与达上市日龄呈显著负相关（P＜0.01）。血清IGF-1含量与日增重呈微弱正相关（P＜0.01）,与达上市体重日龄呈微弱负相关（P＜0.01）。血清BUN、Cl-、Ca2+、T4和leptin与达上市日龄呈低度正相关（P＜0.01）,与日增重呈低度正相关（P＜0.01）。血清ALT与达上市日龄呈低度负相关（P＜0.05）,与日增重呈低度正相关（P＜0.01）。6.血液生理生化指标与胴体性状的相关分析结果血清T3、TSH、INS、NPY、TP、ALB、A/B、TG、HDL-C、LDL-C和K+与所有胴体性状呈微弱相关（|r|＜0.3000）。血清Leptin含量与内脂率呈低度正相关（P＜0.01）,与胴体斜长呈低度负相关（P＜0.01）,与板油率、平均膘厚呈微弱正相关。血清IGF-1与屠宰率、内脂率和6-7肋骨膘厚呈低度负相关（P＜0.01）,与板油率、眼肌面积等呈低度正相关（P＜0.01）。血浆球蛋白含量与内脂率呈低度正相关（P＜0.01）。血清BUN含量与屠宰率、胴体斜长和眼肌面积等呈低度正相关（P＜0.01）,与内脂率呈低度负相关（P＜0.01）。血清肌酐（Cr）含量与屠宰率、胴体长度和眼肌面积（LMA）呈显著正相关（P＜0.01）,与内脂率、板油率和膘厚呈负相关。血清钙离子与胴体长度和肋骨数呈低度负相关（P＜0.01）。7.血液生理生化指标与肉质性状的相关分析结果血清T4与MPV、MS、DL和IF呈负相关（P＜0.01）,与CS和WLP呈显著正相关（P＜0.01）。血清T3与MSF呈显著负相关（P＜0.01）,与IF呈显著正相关（P＜0.01）。血清TSH与MPV、MS、DL和IF呈显著正相关（P＜0.01）,与CS和WLP呈显著负相关（P＜0.01）。血清瘦素与MSF呈显著负相关（P＜0.01）。血清NPY含量与CS、WLP呈显著正相关（P＜0.01）,与MPV、MS、DL和IF呈显著负相关（P＜0.01）。血浆TP含量与CS呈高度正相关（P＜0.01）,与MS、DL、IF和MPV呈显著负相关（P＜0.01）。血浆ALB含量与MS、DL、MPV和IF呈显著负相关（P＜0.01）,与CS和WLP呈显著正相关（P＜0.01）。血液BUN含量与MS、DL、MPV和IF呈正相关（P＜0.01）,与CS和WLP呈显著负相关（P＜0.01）。血清LDL-C含量与DL、MS和IF呈显著正相关（P＜0.01）,与CS和WLP呈显著负相关（P＜0.01）。血清肌酐含量与MS、MPV、DL和IF呈负相关（P＜0.01）,与WLP和CS呈显著正相关（P＜0.01）。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 缩略词表
  • 1 文献综述
  • 1.1 连环素的生物学作用及其研究进展
  • 1.1.1 钙粘素与连环素简介
  • 1.1.2 α-连环素、γ-连环素和p120CTN简介
  • 1.1.3 β-连环素的结构与生物学特征
  • 1.1.4 钙粘素与连环素结合的机制
  • 1.1.5 Wnt/β-连环素蛋白信号通路与生物学功能
  • 1.1.6 连环素介导的钙粘素的主要作用
  • 1.2 几种促生长类激素的作用机制与生物学功能
  • 1.2.1 生长激素与胰岛素样生长因子的促生长机制
  • 1.2.2 瘦素的主要生物学功能
  • 1.2.3 神经肽Y的生物学功能
  • 1.2.4 胰岛素的生物学功能
  • 1.2.5 甲状腺激素的生物学作用
  • 1.3 几种血清酶的主要功能
  • 1.3.1 丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶的功能
  • 1.3.2 肌酸激酶的功能
  • 1.3.3 乳酸脱氢酶的功能
  • 1.3.4 碱性磷酸酶的功能
  • 1.4 血浆蛋白与含氮化合物的主要功能
  • 1.4.1 血浆总蛋白、白蛋白和脂蛋白的功能
  • 1.4.2 血浆胆固醇、甘油三酯、肌酐和尿素氮的主要功能
  • 1.5 电解质的生物学作用
  • 2 研究的目的与意义
  • 3 材料与方法
  • 3.1 材料
  • 3.1.1 实验动物的选择
  • 3.1.2 试验猪的饲养与日常管理
  • 3.1.2.1 日粮的组成及营养水平
  • 3.1.2.2 试验猪的饲养管理
  • 3.1.3 供试样品的采集
  • 3.1.3.1 生理生化指标与激素测定血清样本
  • 3.1.3.3 组织表达谱样本
  • 3.1.4 检测试剂盒
  • 3.1.5 主要试剂及配制
  • 3.1.5.1 主要试剂
  • 3.1.5.2 主要试剂配制
  • 3.1.6 主要仪器设备
  • 3.1.7 主要分子生物学软件和统计软件
  • 3.2 方法
  • 3.2.1 生化指标与激素的测定方法
  • 3.2.2 生产性状与肉质测定方法
  • 3.2.3 猪CTNNB1基因的分离方法
  • 3.2.3.1 猪EST信息的获取和整理
  • 3.2.3.2 引物设计
  • 3.2.3.3 PCR扩增条件
  • 3.2.3.4 PCR产物的纯化、克隆和测序
  • 3.2.4 猪CTNNB1基因组DNA序列的克隆
  • 3.2.4.1 引物的设计
  • 3.2.4.2 PCR扩增条件
  • 3.2.4.3 PCR产物的纯化、克隆和测序
  • 3.2.5 猪CTNNB1基因组织表达谱研究
  • 3.2.5.1 总RNA提取
  • 3.2.5.2 RNA的琼脂糖凝胶电泳检测
  • 3.2.5.3 RT-PCR扩增体系
  • 3.2.6 PCR-RFLP方法检测猪CTNNB1基因的多态性
  • 3.2.6.1 PCR扩增
  • 3.2.6.2 酶切条件
  • 3.2.6.3 基因分型
  • 3.2.7 多态标记与性状和生化指标的关联分析
  • 4 结果
  • 4.1 CTNNB1基因的克隆
  • 4.1.1 PCR扩增的结果
  • 4.1.2 猪CTNNB1基因cDNA序列分析结果
  • 4.2 猪CTNNB1基因组DNA序列分析结果
  • 4.3 猪CTNNB1基因的组织表达结果
  • 4.4 猪CTNNB1基因的多态性检测及其与性状、指标的关联分析
  • 4.4.1 CTNNB1基因内含子突变的位点
  • 4.4.2 CTNNB1基因的多态性检测结果
  • 4.4.3 CTNNB1基因的多态性与部分经济性状的关联分析结果
  • 4.4.4 CTNNB1基因的多态性与部分生化指标的关联分析结果
  • 4.5 血液生理生化指标测定结果
  • 4.5.1 血清激素含量测定结果
  • 4.5.2 血浆蛋白、尿素氮和肌酐含量测定结果
  • 4.5.3 血清脂类物质和血浆脂蛋白含量测定结果
  • 4.5.4 血清K+、Cl—、Ca2+和血糖含量测定结果
  • 4.5.5 通城猪与长白猪血清酶活性测定结果
  • 4.6 血液生理生化指标与生长性状间的相关分析
  • 4.7 血液生理生化指标与胴体性状间的相关分析
  • 4.8 血液生理生化指标与肉质性状的相关分析
  • 5 讨论
  • 5.1 根据EST进行的电子克隆
  • 5.1.2 关于CTNNB1基因的组织表达谱分析
  • 5.1.3 关于CTNNB1基因的多态性检测及关联分析
  • 5.1.3.1 CTNNB1基因的多态性检测
  • 5.1.3.2 CTNNB1基因的多态性性与性状关联分析
  • 5.2 血清激素对生长、胴体和肉质性状的影响
  • 5.2.1 胰岛素素样生长因子-1
  • 5.2.2 瘦素（leptin）
  • 5.2.3 神经肽Y
  • 5.2.4 胰岛素
  • 5.2.5 甲状腺素类激素
  • 5.3 血浆蛋白、尿素氮、肌酐和血糖对生长、胴体和肉质性状的影响
  • 5.3.1 血浆蛋白
  • 5.3.2 尿素氮
  • 5.3.3 肌酐
  • 5.4 脂类物质和血浆脂蛋白对生长、胴体和肉质性状的影响
  • +、Cl-和Ca2+含量及其对猪生产性能的影响'>5.5 血浆K+、Cl-和Ca2+含量及其对猪生产性能的影响
  • 5.6 猪血清酶活性对猪生产、胴体和肉质性状的影响
  • 5.6.1 谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）
  • 5.6.2 肌酸激酶（CK/CPK）、乳酸脱氢酶（LD/LDH）和碱性磷酸酶（ALP）
  • 6 小结
  • 6.1 本研究获得的结果
  • 6.2 本研究的创新点与特色
  • 6.3 本研究的不足之处
  • 6.4 今后工作思路
  • 参考文献
  • 致谢

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