论文摘要
壳寡糖是一类氨基葡萄糖通过β-1,4键成苷而形成的2-10个单元的低聚糖。已有的研究表明,壳寡糖能够诱导烟草对烟草花叶病毒侵染表达系统获得抗病性,抑制病毒粒体复制和长距离移动,系统症状显著减轻。本论文在此基础上,进一步研究了壳寡糖诱导对烟草叶片中活性氧含量（H2O2）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性变化模式以及TMV-MP基因的蓄积量的影响。并以H2O2含量和苯丙氨酸解氨酶活性为指标,进一步研究了壳寡糖诱导抗病性的表达特点。取得了以下主要研究结果:1.浓度为50μg/ml壳寡糖处理烟草1d后接种TMV,烟草体内H2O2含量明显升高且具有两个活性高峰,烟草叶片中H2O2含量在接种后6h（0.25d）达到第一高峰,比接种对照增加了69.09%,接种后第11d达到第二高峰为接种对照的128.97%。这表明壳寡糖诱导早期使烟草体内出现氧化迸发,活性氧水平升高。2.浓度为50μg/ml壳寡糖处理烟草1d后接种TMV,烟草叶片中PAL活性与对照相比,升高幅度大且有两个活性高峰,第6h和第1d达到活性高峰分别比对照增加了90.84%,46.76%。这表明壳寡糖诱导可提高烟草叶片中PAL酶活性。3.分别以壳寡糖诱导处理后烟草H2O2含量和PAL酶活为指标,探讨了其系统获得抗病性表达的一些重要特点,包括最佳诱导浓度、诱导期、抗病性的持效期和治疗作用,取得了明确的结果。4.以烟草叶片中H2O2含量为指标,测得壳寡糖诱导的最佳浓度为50μg/ml,此时H2O2含量比对照增加了95.44%,系统症状减轻。高于或低于这个浓度,病情指数降低率,烟草叶片中H2O2含量均有所降低。以PAL酶活为指标的研究结果与之相同。这表明壳寡糖处理浓度与诱导效应之间的关系不同于杀菌剂。5.壳寡糖诱导处理后12h（0.5d）接种TMV烟草叶片中H2O2含量即可表达高水平,为对照的158.6%,这表明以H2O2为指标,壳寡糖诱导抗病性的诱导期为12h,短于以表观病情为指标所揭示的诱导期。以PAL酶活为指标,壳寡糖诱导1d接种TMV,PAL酶活升高幅度最大,为对照的134.44%,诱导期为1d。6.50μg/ml壳寡糖诱导后接种TMV,烟草叶片中H2O2含量直到第9d时仍保持较高水平,为对照的200%,这说明持效作用可达到9d以上。以PAL酶活为指标的研究结果与之一致。7.烟草接种TMV后不同时间喷布50μg/ml壳寡糖溶液,烟草花叶病系统症状减轻,烟草叶片中H2O2含量增加,第5d时H2O2含量比对照增加了91.71%且高于其它处理。以PAL活性为指标,从第5d时叶片中PAL酶活升高,幅度较其它处理大。这表明壳寡糖诱导烟草抗病性有一定的治疗作用。8.应用实时荧光定量PCR方法,检测壳寡糖诱导效应,发现壳寡糖诱导处理烟草叶片中TMV-MP基因的蓄积量明显减少,在接种病毒7d后壳寡糖诱导处理烟草叶片中TMV-MP基因的蓄积量与同期不诱导对照减少了140.13倍。这表明壳寡糖诱导对病毒粒子的移动具有一定的作用。本研究证明壳寡糖诱导后烟草对TMV表达系统获得抗病性,伴随有H2O2和PAL活性的显著变化。进一步以H2O2和PAL为指标,得出了最佳浓度,诱导期和持效期,并发现在接毒后施用壳寡糖,有一定的治疗作用。应用实时荧光定量PCR方法揭示出壳寡糖诱导具有抑制病毒运动基因蓄积的作用。以上研究为深入进行壳寡糖抗病机制以及壳寡糖制剂的田间合理应用提供了基本依据。