GD动物模型的尝试性复制

论文摘要

Graves’ disease （GD）是一种自身免疫性疾病,其发病原因和致病机理较为复杂,至今为止国内外都没有得出一个明确的结论。本文的目的旨在利用实验动物探究GD可能的发病原因及其内在的致病机理,以期为临床研究提供一个可用实验动物模型的建立方法。通常在未经治疗的GD患者血清中存在着一种促甲状腺素受体抗体（TRAb）,该抗体能与甲状腺细胞膜上的促甲状腺素受体（TSHR）结合并促进T3、T4的合成与分泌。独特型-抗独特型（id and anti-id）免疫网络学说认为TRAb可能相当于TSHAb1诱生的TSHAb2,因TSHAb2含有与TSH相似的结构成为其“内影像”,从而模拟TSH与TSHR结合促使甲状腺激素分泌增加。为验证该理论,本文利用鼠抗人TSH单克隆抗体免疫家兔使其产生针对该抗体的多克隆抗体,也即TSHAb2c随后通过测定免疫后试验动物的T3、T4以及TRAb.甲状腺刺激性抗体（TSAb）,以观察该二抗对实验动物本身的影响。随后进一步提取纯化该多克隆抗体,注射健康家兔后,观察不同时段家兔体内T3、T4水平的变化。利用FRTL-5细胞系生长对TSH的绝对依赖性,使用MTT（四唑盐）比色试验法测定了提取纯化后的多克隆抗体对其生长的维持作用,即该多克隆抗体的类TSH样作用。为进一步观察该多克隆抗体与TSHR结合后的信号传递途径,测定了加入多克隆抗体后FRTL-5细胞中第二信使cAMP的产生情况。为验证该二抗是否能与TSHR结合,利用125I标记的人TSH （125I-hTSH）测定了该多克隆抗体与TSH之间竞争结合TSHR的能力。结果显示经过多次免疫加强后实验动物均能产生针对鼠抗人TSH单克隆抗体的多克隆抗体,伴随抗体效价的不断增高,实验动物T3、T4水平均有不同程度升高,两者呈现一致趋势。在经过4-5次加强免疫后所有实验动物的TRAb和TSAb测定均呈阳性,而且TRAb和TSAb的升高趋势同实验动物抗体的产生趋势相一致。该多克隆抗体同125I-hTSH竞争性结合实验表明,在一定范围内两者间存在着同TSHR竞争性结合的关系。纯化后的多克隆抗体静脉注射正常家兔后可促使其T3,T4升高。MTT比色试验法测定的结果则显示出该多克隆抗体具有类似于TSH样的生物学活性,对于去除了TSH后其它组分不变的培养基中的FRTL-5细胞仍能维持其正常贴壁及生长。cAMP的测定则显示出同加入了hTSH的正常对照组相比,单独加入纯化后的多克隆抗体可显著增加FRTL-5细胞内第二信使cAMP的产生。综上可以看出由免疫鼠抗人TSH单克隆抗体得到的二抗确实模拟了最初的免疫原-hTSH的作用。该抗体不仅成功引起了免疫动物自身T3、T4水平的升高,而且还能促使正常家兔T3、T4水平的升高。进一步的细胞实验证实了该多克隆抗体具有类似于TSH样的活性。而该抗体与TSH之间也存在着同TSHR的竞争性结合。该实验动物模型在部分特征上吻合了GD病人的临床表现,为进一步研究GD的发病原因和致病机理提供了重要的帮助。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 1 对象和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢