导读:本文包含了胰腺干细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胰腺干细胞,牛磺酸,糖尿病,胰岛β细胞
胰腺干细胞论文文献综述
段佳慧[1]（2018）在《牛磺酸对糖尿病模型大鼠胰腺干细胞调控作用的研究》一文中研究指出作为全球范围内的代谢性常见疾病—糖尿病极大地影响着患者的生命质量。常规的药物和胰岛素注射并不足以根治糖尿病。近几年来,逐渐发展起来的干细胞的相关研究,有望从根本上治愈糖尿病及其并发症,因而成为治疗糖尿病的热点研究。本课题组前期研究表明牛磺酸能够抑制糖尿病模型大鼠血糖的升高,保护胰岛β细胞,促进体外培养大鼠胰腺干细胞的增殖,推测其可能通过促进胰腺干细胞的增殖及分化,促进胰岛β细胞数量增加。本试验选取100只SPF级SD雄性大鼠,取50只大鼠腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素(streptozocin,STZ),制备STZ诱导的糖尿病模型,分别于叁天和一周后检测注射STZ大鼠的血糖水平,以随机血糖值均高于16.7 mmol/L判定为模型制备成功。随后将实验动物分为四组,分别为空白对照组(C)、牛磺酸对照组(T)、糖尿病模型组(M)、牛磺酸干预组(T+M)。持续饲养12周,每周检测大鼠随机血糖和体重,分别在牛磺酸干预后4、8、12周检测各组大鼠血液中糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbA1c)、胰岛素(Insulin)、胰高血糖素(Glucagon)、胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide1,GLP-1)水平。采集胰腺组织,通过组织免疫荧光染色法检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2'-Deoxyuridine,BrdU)、Insulin阳性细胞表达情况,免疫荧光双染法检测胰岛β细胞增殖率和细胞角蛋白-19(cytokeratin-19,CK19)阳性细胞增殖率。并通过Western-blot技术检测胰腺组织内Insulin、CK19、巢蛋白(Nestin)、胰腺十二指肠同源异型框基因1(pancreatic duodenal homeobox gene 1,Pdx1)、SRY盒基因9(SRY-box containing gene 9,Sox9)蛋白的相对表达量,以探究牛磺酸对STZ所致糖尿病模型大鼠胰腺干细胞的调控作用及可能机制。试验结果如下:在制备SD大鼠糖尿病模型后,持续补充牛磺酸可显着降低糖尿病模型大鼠的血糖,缩小糖尿病模型大鼠与正常大鼠体重的差异。试验第4周、8周、12周,牛磺酸干预组大鼠血液HbA1c含量显着低于模型组(P<0.05),其中第4周差异极显着(P<0.01)。试验第4周,各组间血清Insulin差异不显着(P>0.05);试验第8周、12周牛磺酸干预组血清Insulin水平显着高于模型组(P<0.05)。牛磺酸干预组第12周血清Glucagon含量显着低于模型组(P<0.05)、血清GLP-1含量显着高于模型组(P<0.05)。BrdU免疫荧光染色结果显示,牛磺酸干预组胰腺组织内BrdU阳性率高于模型组且差异极显着(P<0.01)。牛磺酸干预组胰腺组织内Insulin阳性率高于模型组且差异显着(P<0.05)。免疫荧光双染试验结果表明,试验第8周,牛磺酸干预组大鼠胰岛β细胞增殖率极显著高于模型组(P<0.01);试验第12周,牛磺酸干预组大鼠胰岛β细胞增殖率显著高于模型组(P<0.05)。各个时间点,CK19阳性细胞增殖率各组间差异不显着(P>0.05)。Western-blot试验结果显示,牛磺酸显着上调胰腺组织Insulin、Nestin、Pdx1、Sox9蛋白相对表达量(P<0.05),对CK19调控作用并不明显(P>0.05)。本试验结果显示,牛磺酸可上调STZ诱导的糖尿病模型大鼠胰腺干细胞标志物表达,促进胰岛β的增殖、分化,改善由STZ诱导的糖尿病模型大鼠的血糖升高,体重降低等糖尿病症状。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2018-06-15）
徐栓栓[2]（2018）在《SerpinB1在猪胰腺干细胞增殖及向胰岛素分泌细胞分化中的作用及机理》一文中研究指出糖尿病是一种代谢类疾病,又称高血糖症,表现为多食、多尿、多饮、体重减少。长期的高血糖引起机体多个组织器官的损伤,尤其是眼、肾、心脏、血管和神经等的功能障碍。胰岛β细胞损伤是糖尿病的症结所在。猪的胰腺干细胞(Pocine Pancretic Stem Cells,pPSCs)是从胎猪胰腺中分离出来的一种成体干细胞,在细胞中转入大T载体形成永生化细胞系,实验室先前的研究证明该细胞经化学小分子诱导可分化为胰岛素分泌细胞。又因猪的基因组以及胰岛素的结构与人的相似性,所以研究pPSCs对未来糖尿病的临床治疗具有深远的意义。SerpinB1是一种蛋白酶抑制剂,通过抑制蛋白酶活性缓解由炎性反应所引起的组织损伤。有研究表明,肝的胰岛素抵抗促进了SerpinB1的分泌,作用于胰腺促进胰岛β细胞的增殖,并且这一反应与其蛋白酶抑制剂活性相关。干细胞的自我更新和分化受到机体内多种细胞因子的调控,胰腺干细胞作为一种成体干细胞,SerpinB1对成体干细胞-猪胰腺干细胞的影响目前仍不清楚。本实验探究了SerpinB1对pPSCs中影响及作用机理。通过超表达和干扰pPSCs中SerpinB1的表达,一方面证实超表达SerpinB1可以促进pPSCs的增殖,另一方面发现SerpinB1在pPSCs诱导分化后期表达量增加,干扰SerpinB1影响了pPSCs的诱导分化效率,不利于胰岛素分泌细胞的形成。本实验为pPSCs的增殖机制提供了理论依据,另外为体外高效的获得胰岛素分泌细胞提供了新的思路和手段。1.SerpinB1促进pPSCs的增殖首先,通过运用qRT-PCR(实时荧光定量)对pPSCs中的SerpinB1的mRNA水平进行检测发现,SerpinB1在pPSCs中大量表达。随后一方面运用shRNA干扰SerpinB1在细胞中的表达,另一方面使细胞超表达SerpinB1。通过CCK-8检测发现干扰SerpinB1使细胞的活性降低,超表达SerpinB1增强了细胞活性。随后的EdU、流式细胞术周期检测以及qRT-PCR结果显示,与正常的细胞相比,干扰SerpinB1后细胞的EdU阳性率明显降低,处于S期的细胞比率下降,并且细胞中CDK2、PCNA以及CyclinD1的mRNA表达水平显着降低,说明SerpinB1促进pPSCs进入S期而促进pPSCs的增殖。Western blotting检测蛋白水平结果显示,超表达SerpinB1激活了STAT3、CDK2、和CyclinD1蛋白水平的表达,抑制了P53和P21的表达。所以我们推测SerpinB1通过STAT3信号通路促进pPSCs的增殖。2.SerpinB1促进pPSCs诱导分化成胰岛素分泌细胞首先,我们运用两步诱导法诱导pPSCs形成胰岛素分泌细胞,qRT-PCR和Western blotting的检测结果显示胰岛素分泌细胞中SerpinB1的表达水平显着升高。随后分别在诱导1d、3d、9d取样进行Western blotting检测发现,SerpinB1在整个诱导过程中的表达逐渐升高。其后,分别对干扰和超表达SerpinB1的pPSCs进行诱导,与对照组相比,发现干扰SerpinB1的表达后,诱导形成的胰岛素分泌细胞在悬浮诱导培养基中聚团松散不致密,培养基中存在大量悬浮的零散细胞,聚团后的细胞不易贴壁,细胞迁出率低,DTZ和Insulin染色显色不明显,在mRNA水平低表达Insulin、NeuroD、PDX1、Glut-2、Nkx6.1和MafA,并且ELISA检测发现,高糖刺激反应不灵敏。超表达SerpinB1后,在mRNA水平,Insulin、NeuroD、PDX1、Glut-2、Nkx6.1和MafA的表达明显升高,胰岛素分泌量显着性的增加。据此我们推测,SerpinB1影响了pPSCs向胰岛素分泌细胞的诱导效率。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
杨泓[3]（2018）在《叶酸对猪胰腺干细胞增殖及向胰岛素分泌细胞分化的影响》一文中研究指出糖尿病(Diabetes mellitus,DM),作为一类慢性代谢性疾病,具有极高的发病率和高致死率,对公众的健康造成了极其严重的威胁。DM病发的主要原因是胰岛β细胞的损伤导致胰岛素分泌不足或机体利用障碍。目前,针对DM治疗的研究主要集中在β细胞再生疗法。猪胰腺干细胞(porcine pancreatic stem cells,pPSCs)是通过收集胎猪胰腺组织分离获得的一类干细胞,我们已证实该细胞可以经体外诱导分化成为具有胰岛素分泌功能的细胞(insulin-producing cells,IPCs)。同时解剖学结构显示猪和人类的胰岛结构、大小又最为相近,所以经pPSCs诱导获得的IPCs有望用于人类DM的临床治疗。叶酸(folic acid,FA),一直被认为是以维生素的角色参与DNA和RNA合成过程,影响细胞的自我更新、增殖与分化。而近期的研究表明,FA可以直接作为一种信号分子促进生殖干细胞的增殖。到目前为止,FA对pPSCs的增殖和分化的作用及机理仍不清楚。本试验针对FA对pPSCs增殖和在pPSCs向IPCs定向分化中的作用,以及FA调控pPSCs增殖和分化的机制展开了研究,得到的结果如下:1.FA通过结合叶酸受体FOLRα同时激活Wnt信号通路和ERK通路,促进pPSCs的增殖通过CCK8和EDU染色评估FA对pPSCs增殖的影响,发现FA处理组细胞EDU阳性率高、增殖速度快,说明FA促进pPSCs的增殖。qRT-PCR及Western blotting结果表明,经FA作用后,pPSCs中的PCNA、CyclinD1、c-Myc在蛋白和RNA的表达水平上均上调,进一步说明FA作用细胞增殖速度加快,而加入FA抑制剂MTX后,这些指标都降低,明确FA对pPSCs的促增殖作用。同时FA对pPSCs产生促增殖作用的同时,刺激叶酸受体FOLRα的表达上调,而干扰FOLRα表达则抑制pPSCs的增殖,说明FA通过结合叶酸受体FOLRα促进pPSCs的增殖。进一步的机制研究中,Western blotting显示,pPSCs在经FA处理后,细胞中经典Wnt信号通路和ERK信号通路中的关键蛋白activeβ-catenin和p-ERK的表达均增高,进一步地分别添加通路抑制剂对两条信号通路造成抑制后,FA对细胞的促增殖作用又明显抑制。以上结果表明FA通过结合叶酸受体FOLRα同时激活Wnt信号通路和ERK通路对pPSCs发挥促增殖的作用。2.FA可以提高pPSCs向IPCs的分化的诱导效率实验室先前的研究已经证实pPSCs可以在体外诱导成为IPCs,在此基础上添加FA来探究其对pPSCs向IPCs诱导分化的影响。检测结果显示:在诱导过程添加FA获得的细胞团中,双硫腙染色DTZ着色加深,β细胞成熟标志基因Insulin、NKX6.1、MafA、NeuroD1在mRNA水平表达升高,功能基因Insulin、C-peptide蛋白表达水平升高,同时对高糖应答分泌胰岛素能力升高。与此同时,与增殖试验类似,Western blotting检测发现诱导过程中添加FA得到的细胞团中Wnt信号通路和ERK通路的关键蛋白activeβ-catenin、p-ERK的表达均有上调;进一步在诱导过程中通过添加通路抑制剂抑制这两条通路,qRT-PCR检测发现β细胞成熟标志基因Insulin、NKX6.1、MafA、NeuroD1的表达下调,表明FA的促分化作用被抑制,说明FA对pPSCs的促分化作用同样的与Wnt信号通路和ERK通路有关。综上所述:FA结合叶酸受体FOLRα促进pPSCs的增殖;在体外诱导分化过程中FA作用会上调pPSCs向IPCs定向分化的效率;Wnt信号通路和ERK通路参与调控FA对pPSCs的促增殖和促分化作用。本研究为pPSCs治疗糖尿病的研究和临床运用提供了新的方向。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
岑妍慧,李中华,贾微,杨瑞,包鹃[4]（2018）在《雷公藤多糖诱导胰腺干细胞成胰岛样细胞团（英文）》一文中研究指出背景:胰岛细胞来源不足说明胰岛细胞移植治疗糖尿病不能满足临床需要。因此,体外诱导胰腺干细胞分化为胰岛细胞成为研究的热点。目的:观察雷公藤多糖对小鼠胰岛来源的胰腺干细胞的诱导分化作用,从而探索中药诱导胰腺干细胞分化为胰岛β细胞的作用。方法:采用雷公藤多糖体外诱导经纯化的小鼠胰腺干细胞分化为胰岛细胞。胰岛样细胞团进行形态学观察,双硫腙染色和Western blot分析。结果与结论:①细胞形态学、细胞生长特性及免疫细胞化学染色显示,实验不仅得到了纯度高的小鼠胰腺干细胞,而且该细胞经雷公藤多糖诱导后能形成球形的胰岛样结构,有细长的蒂与培养瓶底部相连,双硫腙染色呈铁红色;②Western-blot检测显示,胰岛样细胞团中有β细胞素蛋白的表达;③结果表明,小鼠胰腺干细胞可以体外经雷公藤多糖诱导分化为含有β细胞的胰岛样细胞团。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年05期）
王海林,戴睿武[5]（2017）在《胰腺干细胞组织来源与分子标记物的研究进展》一文中研究指出胰腺疾病如胰腺创伤、胰腺炎、胰腺肿瘤和糖尿病等所致的胰腺损伤可引发机体内外分泌的紊乱并危害人类健康,现阶段临床上对于胰腺疾病的治疗效果总体来讲不甚理想。即使当前移植领域的技术有了极大发展,然而由于胰腺移植供体不足和排异反应等切实问题尚不能解决~([1]),故未在临床上开展。因此治疗手段的研究还需另辟蹊径,近年来随着胚胎发生学的研究和细胞工程、组织工程技术等再生医学领域的发展,各领域研究者都把干细胞视为组织器官损伤修复与(本文来源于《肝胆外科杂志》期刊2017年06期）
段佳慧,赵冬冬,李凯新,赵晓艳,左文君[6]（2017）在《胰腺干细胞分化为胰岛细胞的诱导方法》一文中研究指出糖尿病作为全球范围内的代谢性常见疾病,严重影响着患者的生命质量。常规的药物和胰岛素注射并不足以根治糖尿病。近年来,逐渐发展起来的干细胞的相关研究,有望从根本上治愈糖尿病及其并发症,因而成为治疗糖尿病的研究热点。而利用干细胞医治糖尿病的关键点是明确干细胞的来源及分化为胰岛细胞的诱导方法。论文针对胰腺干细胞存在部位及诱导方法的研究概况做一综述。(本文来源于《动物医学进展》期刊2017年12期）
梁巍巍[7]（2017）在《牛磺酸对STZ诱导糖尿病大鼠胰腺干细胞增殖作用的研究》一文中研究指出糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一种以胰岛β细胞进行性功能衰竭导致血糖升高为主要病理生理过程的代谢性疾病。现行的治疗手段主要通过刺激患者体内残存胰岛功能,达到暂时平稳控制血糖水平的目的。但从远期疗效来看,随着残存胰岛负担的加重,最终会出现典型糖尿病症状和多种并发症。近年来的研究已经证实胰腺内存在干细胞,研究糖尿病病理状态下调控胰腺干细胞增殖分化为功能性胰岛β细胞,有望从细胞和分子水平治疗糖尿病。大量动物试验研究表明,补充适量牛磺酸能够降低糖尿病动物血糖水平,改善糖尿病症状,防止并发症的发生。本课题组前期通过动物试验进一步证实,牛磺酸能够增加STZ诱导的糖尿病大鼠胰岛干细胞数量,上调胰腺干细胞表面标志物的表达,提示牛磺酸可能通过促进胰腺干细胞增殖及分化为成熟胰岛β细胞发挥降糖作用,但具体调控机制尚不清楚。本研究拟从细胞和分子水平研究牛磺酸对糖尿病大鼠胰腺干细胞增殖活性的影响及其调控机制,以期为临床应用牛磺酸防治人类及动物糖尿病提供理论依据。本研究主要分为叁部分:(1)采用单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法建立大鼠糖尿病模型,从模型大鼠胰腺导管分离、提取、纯化胰腺干细胞,并进行体外传代培养;通过免疫细胞化学法鉴定胰腺干细胞表面标志物(Nestin、CK-19和PDX-1)的表达。(2)将糖尿病大鼠胰腺干细胞分为对照组(基础培养基)和牛磺酸组(基础培养基中加入10 mmol/L牛磺酸)。通过免疫荧光化学法定性、定量检测各组胰腺干细胞表面标志物(Nestin、CK-19和PDX-1)的表达情况;通过MTT法和流式细胞术分别检测牛磺酸对糖尿病大鼠胰腺干细胞增殖活力和细胞周期的作用;通过实时荧光定量PCR及Western-blot技术检测牛磺酸对糖尿病大鼠胰腺干细胞PCNA和Ki67 mRNA及蛋白表达的影响。(3)应用基因表达谱芯片筛选对照组和牛磺酸组胰腺干细胞差异表达的基因,差异分析的筛选标准为上调或者下调倍数变化值Fold change≥2.0,且p<0.05;通过GO富集分析和KEGG富集分析方法对差异基因参与的生物学功能和信号通路进行分析;应用实时荧光定量PCR法验证差异表达基因。得出试验结果如下:(1)采用单次腹腔注射STZ(50 mg/kg)的方法建立大鼠糖尿病模型,给药72 h后大鼠血糖显着升高,7天后表现出多饮、多食、多尿、消瘦的典型糖尿病症状,最终以血糖浓度≥16.7 mmol/L作为诱导糖尿病大鼠模型的成功标准,成模率为70%。此模型符合人类及动物糖尿病的发病特点,可以用于糖尿病大鼠胰腺干细胞的体外培养试验。(2)应用机械剪碎法和胶原酶消化法成功提取了胰腺导管上皮细胞,通过贴壁培养、换液洗涤和传代等方法,有效提高了胰腺干细胞纯度;经免疫细胞化学法鉴定干细胞表面标志物,Nestin、CK-19和PDX-1染色阳性细胞均达到85%以上,为后续试验提供了可靠的材料。(3)应用免疫荧光化学法定性、定量检测对照组和牛磺酸组胰腺干细胞表面标志物的表达,对免疫荧光染色阳性的图片进行半定量分析。结果表明:Nestin、CK-19、PDX-1在各组细胞胞浆染色均为阳性,而Glucagon和Insulin染色均为阴性;经牛磺酸处理,Nestin、CK-19、PDX-1叁种抗原的荧光强度虽然略有增强,但没有显着差异(p>0.05)。说明从糖尿病大鼠提取的胰腺干细胞经牛磺酸处理后,其形态和干细胞表面标志物表达没有显着改变,可在体外培养并稳定传代。(4)应用MTT法检测体外培养糖尿病大鼠胰腺干细胞的增殖活力,牛磺酸作用24 h后胰腺干细胞增殖活力没有显着变化(p>0.05);随着牛磺酸作用时间延长,48h、72 h、96 h牛磺酸组胰腺干细胞增殖活力显着增强(p<0.01)。(5)应用流式细胞术分析牛磺酸对糖尿病大鼠胰腺干细胞周期的影响,对照组胰腺干细胞S期百分比和增殖指数分别为15.73%和50.77%,经牛磺酸处理,S期百分比和增殖指数分别提高到28.57%和61.02%,说明牛磺酸显着提高了糖尿病大鼠胰腺干细胞的增殖潜能(p<0.01)。(6)应用实时荧光定量PCR和Western Blot法,在转录和蛋白水平检测牛磺酸对细胞增殖相关抗原PCNA和Ki67表达的调控作用。结果显示:与对照组相比,牛磺酸组PCNA mRNA表达增加1.49倍,Ki67 mRNA表达增加2.12倍;对照组糖尿病大鼠胰腺干细胞PCNA和Ki67蛋白的相对表达量分别为0.26和0.34,牛磺酸组PCNA和Ki67蛋白的相对表达量分别为0.56和0.53,说明牛磺酸显着上调了PCNA与Ki67 m RNA和蛋白的表达(p<0.01)。(7)以STZ诱导糖尿病大鼠为研究对象,应用基因表达谱分析技术,筛选牛磺酸处理后大鼠胰腺干细胞差异表达基因。共筛选出差异表达的mRNA 3028个,其中上调mRNA 2268个(Fold change≥2,p<0.05),下调mRNA 760个(Fold change≤-2,p<0.05)。通过实时荧光定量PCR法对差异表达基因进行验证,其变化趋势与芯片结果基本一致,说明芯片数据结果可靠。(8)GO富集分析包括生物学过程、细胞组分、分子功能叁大板块:整张芯片注释到生物学进程板块中GO的基因数为17184个,注释到GO的总靶基因数为1806个,差异基因参与调控的生物学进程依次为凋亡过程的负性调节、衰老、RNA聚合酶II启动子转录的正性调节、对缺氧的反应、创伤修复等;整张芯片注释到细胞组分板块中GO的基因数为17746个,注释到GO的总靶基因数为1863个,差异基因参与调控的细胞组分依次为细胞核、细胞质、细胞外的外泌体、细胞膜、粘合斑等;整张芯片注释到分子功能板块中GO的基因数为16594个,注释到GO的总靶基因数为1757个,差异基因参与调控的分子功能依次为蛋白结合、poly(A)RNA结合、ATP结合、蛋白质复合物结合、蛋白质异源二聚化活性等(FDR_bh<0.05)。(9)KEGG富集分析显示,整张芯片注释到KEGG的基因数为7808个,其中上调总靶基因数为702个,下调总靶基因数为216个。经牛磺酸处理后,上调差异基因参与的Pathway依次为肿瘤坏死因子信号通路、蛋白质在内质网的加工、癌症通路、NOD样受体信号通路、癌症相关蛋白聚糖等;下调差异基因参与的Pathway有2个,分别为酒精中毒和系统性红斑狼疮(FDR_bh<0.05)。(10)通过生物信息学综合分析,初步筛选出与牛磺酸促胰腺干细胞增殖相关的10条通路,分别是TNF信号通路、NF-κB信号通路、PI3K-AKt信号通路、Fox O信号通路、TGF-β信号通路、Ras信号通路、MAPK信号通路、Jak-STAT信号通路、Notch信号通路和Wnt信号通路。进一步分析各通路关键调控靶点的基因表达变化,确定NF-κB和Ras/ERK信号通路为牛磺酸促胰腺干细胞增殖密切相关的通路。通过实时荧光定量PCR法证实牛磺酸显着上调了NF-κB和Ras/ERK信号通路中关键靶点mRNA水平(Chuk、Egfr、Il1r1、Mapk1、Mki67、Nfkb1、Nras、Pcna、Pdgfra、Rela、Ripk1、Tlr4)(p<0.01),表明牛磺酸通过NF-κB和Ras/ERK信号通路促进了糖尿病大鼠胰腺干细胞的增殖。综上所述,本研究通过腹腔注射STZ法建立了大鼠糖尿病模型,并从该模型大鼠胰腺导管成功提取、分离、纯化胰腺干细胞,在体外稳定传代培养;牛磺酸显着增加了糖尿病大鼠胰腺干细胞活力、细胞周期中DNA合成期的比例和增殖指数,显着上调了细胞增殖相关抗原m RNA和蛋白的表达;牛磺酸通过NF-κB和Ras/ERK信号通路促进了糖尿病大鼠胰腺干细胞的增殖。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2017-12-12）
杨沛霖[8]（2017）在《牛磺酸对体外培养大鼠胰腺干细胞增殖及分化影响的研究》一文中研究指出目前糖尿病严重影响患者的生活质量,并且可引发严重的糖尿病并发症。传统的治疗手段主要通过药物刺激体内胰岛素分泌,或者体外注射胰岛素达到平稳血糖的目的,却不能彻底修复糖尿病患者的胰岛病变。近年来,有研究发现胰腺内存在胰腺干细胞,并且可在体外诱导形成具有功能性的胰岛β细胞,这为治疗糖尿病提供了新的思路。临床和动物试验均证明,补充牛磺酸能够降低糖尿病患者的血糖水平,改善临床症状,并防止并发症的发生。课题组前期试验证明,应用牛磺酸能够促进STZ诱导糖尿病大鼠胰岛干细胞的增殖,上调胰腺干细胞向胰岛β细胞分化标志因子的表达,提示牛磺酸可促进糖尿病状态下胰岛干细胞的增殖分化,但其作用机制尚不清楚。因此本研究通过体外试验分离培养大鼠胰腺干细胞,探讨牛磺酸胰腺干细胞增殖及分化作用机理,为应用牛磺酸防治糖尿病提供理论依据。本试验选取180-220gSD大鼠采用机械消化法分离培养出原代大鼠胰腺干细胞,经胰腺干细胞标志物PDX1、Nestin和CK19免疫组化鉴定后,培养液中添加不同浓度(5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L和20mmol/L)的牛磺酸对4-6代并处于对数生长期的胰腺干细胞进行孵育,处理24h、48h、72h、96h、120h、144h后MTS法检测胰腺干细胞的增殖活性,并确定牛磺酸处理的适宜浓度;在适宜浓度牛磺酸下连续处理原代胰腺干细胞至第4代,提取胰腺干细胞总蛋白,western-blot法检测胰腺干细胞发育过程中调控因子(PDX1、Ptfla、Ngn3、Nestin、CK19、SOX9)蛋白表达水平的变化。试验结果显示:免疫组化鉴定胰腺干细胞标志物PDX1、Nestin和CK19均表达呈阳性,说明分离得到的细胞为胰腺干细胞;10mmol/L和15mmol/L牛磺酸浓度组细胞增殖活性高于其余各组;胰腺干细胞调控因子蛋白表达量变化表明:1Ommol/L牛磺酸组与对照组相比PDX1和Ptfla表达量无明显差异,但CK19表达量表达量升高且差异显着(P<0.05);15mmol/L牛磺酸组与对照组比较,PDX1、CK19、Ptfla表达量上调差异极显着(P<0.01);与对照组相比牛磺酸组SOX9和Ngn3表达量均上.调差异极显着(P<0.01),但Nestin表达量无差异(P>0.05)。结果证明:1.牛磺酸可明显促进体外培养胰腺干细胞的增殖活性,且适宜添加浓度为10mmol/L和15mmol/L。2.牛磺酸可显着促进体外培养胰腺干细胞PDX1、Ptfla、Ngn3、CK19、SOX9的表达,而对Nestin无影响,表明牛磺酸可促进胰腺干细胞分化。3.经过进一步分析,牛磺酸促胰腺干细胞分化机制可能与对Wnt通路、Notch通路以及FGF10通路的调控有关。(本文来源于《沈阳农业大学》期刊2017-06-07）
岑妍慧,杨瑞,贾微,李中华,钟振国[9]（2017）在《饲养层条件下昆明小鼠胰岛来源胰腺干细胞的建系及鉴定（英文）》一文中研究指出背景:到目前为止关于胰腺干细胞能建株甚至建系的报道极少,而且建系率较低,纯化出胰腺干细胞仍有一定的困难。目的:探索一套更合理、更有效的胰腺干细胞在体外分离及连续传代的技术和方法,使其有望能建立成细胞株甚至细胞系,为后续胰腺干细胞治疗糖尿病的相关研究奠定基础。方法:实验首先通过Percoll不连续密度梯度离心的方法,使小鼠胰腺的内、外分泌部的细胞分布在不同的密度界面,然后获得来源于胰腺内分泌部即胰岛的干细胞,使用经丝裂霉素C作用的小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,在饲养层条件下对来源于胰岛的胰腺干细胞进行连续传代,使其连续传至第30代,并通过生长特性检测、形态学观察、相关分子标志物鉴定以及分化特性鉴定等一系列的检测完善对该胰岛来源的胰腺干细胞株检测和鉴定。结果与结论:在连续传代过程中胰腺干细胞均体现了活跃的分裂增殖能力,并保持典型的干细胞形态学特征、表达胰腺干细胞分子标志物Nestin,经诱导分化后表达胰岛素基因,体现出了分化潜能。结果说明,实验饲养层条件下成功建立并鉴定了昆明小鼠胰岛来源的胰腺干细胞株。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2017年13期）
王海林[10]（2017）在《基于损伤范围控制的大鼠胰腺创伤模型建立及其胰腺干细胞增殖规律的研究》一文中研究指出目的:1、研制一种多功能小动物撞击系统并评估其初步使用效果,为进一步动物实验建立创伤模型及为满足创伤基础医学研究提供仪器需要。2、建立一种新型的大鼠单纯胰腺创伤模型,并基于损伤范围评估其伤情变化,为后续研究提供模型条件。3、研究胰腺干细胞在本研究的大鼠胰腺大范围创伤模型中增殖变化规律。方法:1、撞击仪系统基于储能换能装置、简便式多功能撞击装置、撞击参数测量装置等叁大部件的相关原理设计,并进一步检验其有效性和稳定性。2、将大鼠随机分为2组,采用自主研发多功能撞击仪的3cm2和6cm2撞击头,分别撞击各组处于开腹状态的胰腺,使之在400kpa的压强下形成对应不等范围的损伤,并设置对照;建模24h后观察各组大鼠存活率、一般情况、大体病理和组织病理学改变,并检测血钾、血钙的浓度和血清、腹水中淀粉酶、脂肪酶的水平。3、将大鼠随机分为创伤组和对照组,前者接受6cm2/400Kpa的撞击强度,后者为假手术组;建模后1、2、3、7天处死大鼠,处死前12h按100mg/kg体重经腹腔注射5-溴-2'脱氧脲嘧啶核苷(Brd U);取胰腺组织,荧光TUNEL检测细胞凋亡,Brd U的免疫组化染色检测细胞增殖,RT-PCR、免疫组化(荧光)和Western blot等方法检测PDX-1的表达并探讨其变化规律。结果:1、多功能小动物撞击系统研制完成,其撞击应力峰值连续可调节且量程在0-200kg,压缩和挤压应力连续可调节且量程在0-100kg;经验证,该仪器具有良好的有效性(P(27)0.05)和可重复性(P(29)0.05)。2、成功构建了大鼠胰腺创伤模型;3cm2和6cm2致伤面积组均能形成明显的损伤,其中致伤组死亡率、腹水量、胰腺湿重、病理评分、血清酶学指标均高于对照组(P(27)0.05),血钾、血钙较对照组低(P(27)0.05),而6cm2致伤面积组的损伤比3cm2组更显着。3、胰腺创伤模型中,伤后24h胰腺即可发生凋亡与代偿性增殖;PDX-1的表达增强主要在建模后的第2-3天,随后下降,至第7天恢复至正常水平附近,伤后第2,3天与同时间点对照组比较,有显着性差异(P(27)0.05)。结论:1、研制的撞击仪操作简单,撞击方式多样,撞击参数可被实时记录;经过调试和动物实验,效果显着且性能稳定,可对不同实验动物形成不同强度和方式的创伤;适用于撞击伤的建模和形态、机能学的研究。2、该胰腺创伤建模简单、模型有效、操作的可重复性好,伤情单一且稳定。适合用于伤情演化机制和创伤施救等研究。3、胰腺创伤后,胰腺干细胞将发生活化,在创伤后修复期增殖并分化为各类功能细胞,一定程度补偿了胰腺受损害的功能。(本文来源于《西南医科大学》期刊2017-05-01）
胰腺干细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
糖尿病是一种代谢类疾病,又称高血糖症,表现为多食、多尿、多饮、体重减少。长期的高血糖引起机体多个组织器官的损伤,尤其是眼、肾、心脏、血管和神经等的功能障碍。胰岛β细胞损伤是糖尿病的症结所在。猪的胰腺干细胞(Pocine Pancretic Stem Cells,pPSCs)是从胎猪胰腺中分离出来的一种成体干细胞,在细胞中转入大T载体形成永生化细胞系,实验室先前的研究证明该细胞经化学小分子诱导可分化为胰岛素分泌细胞。又因猪的基因组以及胰岛素的结构与人的相似性,所以研究pPSCs对未来糖尿病的临床治疗具有深远的意义。SerpinB1是一种蛋白酶抑制剂,通过抑制蛋白酶活性缓解由炎性反应所引起的组织损伤。有研究表明,肝的胰岛素抵抗促进了SerpinB1的分泌,作用于胰腺促进胰岛β细胞的增殖,并且这一反应与其蛋白酶抑制剂活性相关。干细胞的自我更新和分化受到机体内多种细胞因子的调控,胰腺干细胞作为一种成体干细胞,SerpinB1对成体干细胞-猪胰腺干细胞的影响目前仍不清楚。本实验探究了SerpinB1对pPSCs中影响及作用机理。通过超表达和干扰pPSCs中SerpinB1的表达,一方面证实超表达SerpinB1可以促进pPSCs的增殖,另一方面发现SerpinB1在pPSCs诱导分化后期表达量增加,干扰SerpinB1影响了pPSCs的诱导分化效率,不利于胰岛素分泌细胞的形成。本实验为pPSCs的增殖机制提供了理论依据,另外为体外高效的获得胰岛素分泌细胞提供了新的思路和手段。1.SerpinB1促进pPSCs的增殖首先,通过运用qRT-PCR(实时荧光定量)对pPSCs中的SerpinB1的mRNA水平进行检测发现,SerpinB1在pPSCs中大量表达。随后一方面运用shRNA干扰SerpinB1在细胞中的表达,另一方面使细胞超表达SerpinB1。通过CCK-8检测发现干扰SerpinB1使细胞的活性降低,超表达SerpinB1增强了细胞活性。随后的EdU、流式细胞术周期检测以及qRT-PCR结果显示,与正常的细胞相比,干扰SerpinB1后细胞的EdU阳性率明显降低,处于S期的细胞比率下降,并且细胞中CDK2、PCNA以及CyclinD1的mRNA表达水平显着降低,说明SerpinB1促进pPSCs进入S期而促进pPSCs的增殖。Western blotting检测蛋白水平结果显示,超表达SerpinB1激活了STAT3、CDK2、和CyclinD1蛋白水平的表达,抑制了P53和P21的表达。所以我们推测SerpinB1通过STAT3信号通路促进pPSCs的增殖。2.SerpinB1促进pPSCs诱导分化成胰岛素分泌细胞首先,我们运用两步诱导法诱导pPSCs形成胰岛素分泌细胞,qRT-PCR和Western blotting的检测结果显示胰岛素分泌细胞中SerpinB1的表达水平显着升高。随后分别在诱导1d、3d、9d取样进行Western blotting检测发现,SerpinB1在整个诱导过程中的表达逐渐升高。其后,分别对干扰和超表达SerpinB1的pPSCs进行诱导,与对照组相比,发现干扰SerpinB1的表达后,诱导形成的胰岛素分泌细胞在悬浮诱导培养基中聚团松散不致密,培养基中存在大量悬浮的零散细胞,聚团后的细胞不易贴壁,细胞迁出率低,DTZ和Insulin染色显色不明显,在mRNA水平低表达Insulin、NeuroD、PDX1、Glut-2、Nkx6.1和MafA,并且ELISA检测发现,高糖刺激反应不灵敏。超表达SerpinB1后,在mRNA水平,Insulin、NeuroD、PDX1、Glut-2、Nkx6.1和MafA的表达明显升高,胰岛素分泌量显着性的增加。据此我们推测,SerpinB1影响了pPSCs向胰岛素分泌细胞的诱导效率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
胰腺干细胞论文参考文献
[1].段佳慧.牛磺酸对糖尿病模型大鼠胰腺干细胞调控作用的研究[D].沈阳农业大学.2018
[2].徐栓栓.SerpinB1在猪胰腺干细胞增殖及向胰岛素分泌细胞分化中的作用及机理[D].西北农林科技大学.2018
[3].杨泓.叶酸对猪胰腺干细胞增殖及向胰岛素分泌细胞分化的影响[D].西北农林科技大学.2018
[4].岑妍慧,李中华,贾微,杨瑞,包鹃.雷公藤多糖诱导胰腺干细胞成胰岛样细胞团（英文）[J].中国组织工程研究.2018
[5].王海林,戴睿武.胰腺干细胞组织来源与分子标记物的研究进展[J].肝胆外科杂志.2017
[6].段佳慧,赵冬冬,李凯新,赵晓艳,左文君.胰腺干细胞分化为胰岛细胞的诱导方法[J].动物医学进展.2017
[7].梁巍巍.牛磺酸对STZ诱导糖尿病大鼠胰腺干细胞增殖作用的研究[D].沈阳农业大学.2017
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