论文摘要
采用现代胚胎生物工程技术是使畜牧业向高产、高效、优质、集约化发展的有效途径。但是,体外受精胚胎和克隆胚胎发育率低是制约这两项技术走向生产实践的最大障碍。本研究借助免疫荧光染色的方法,从中心体复制的关键调控基因CDK2和P53入手,研究CDK2和P53在经体外成熟18-26小时的牛成熟卵母细胞中的亚细胞定位,揭示它们在中心体复制过程中位置,分析CDK2和P53在牛成熟卵母细胞中的表达情况,从中心体异常复制的角度阐明体外受精胚胎和克隆胚胎染色体的不稳定性。研究结果如下:研究哺乳动物胚胎的免疫荧光染色条件和步骤。通过对小鼠受精卵中CDK2、P53和γ-tubulin蛋白的免疫荧光染色研究,对免疫荧光染色的条件和步骤不断优化,修改、简化和发展,摸索出一套完善的针对卵母细胞的免疫荧光染色步骤。在小鼠受精卵1细胞G1期,通过固定、封闭、染色、在荧光显微镜下观察,发现CDK2、P53和γ-tubulin蛋白均出现染色阳性。CDK2和P53在细胞有丝分裂G1期定位于中心体,分布于细胞核区。分别培养18h,22h,26h后的牛成熟卵母细胞,通过与试验一相同的固定、封闭、染色,在荧光显微镜下观察发现,（1）培养18h后的牛成熟卵母细胞,CDK2、P53和γ-tubulin蛋白均出现染色阴性。（2）培养22h后的牛成熟卵母细胞,大多数卵母细胞CDK2、P53和γ-tubulin蛋白出现染色阴性,仅有少数卵母细胞CDK2、P53和γ-tubulin蛋白出现染色阳性。（3）培养26h后的牛成熟卵母细胞,大多数卵母细胞CDK2、P53和γ-tubulin蛋白出现染色阴性,仅有少数卵母细胞CDK2、P53和γ-tubulin蛋白出现染色阳性。（4）在出现染色阳性的牛成熟卵母细胞中,CDK2和P53蛋白定位于中心体,分布于细胞核区。CDK2和P53蛋白是与细胞中心体复制密切相关的两个蛋白,其功能和细胞的正常分裂发育有关。在用于牛体外胚胎生产的牛卵母细胞中,CDK2和P53蛋白的正常表达与否,是直接影响牛体外胚胎生产效率的原因之一。
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