富血小板血浆诱导兔骨髓基质干细胞分化为成骨细胞的实验研究

论文摘要

目的观察富血小板血浆（Platelet-rich plasma，PRP）对体外培养兔骨髓基质干细胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）的增殖和成骨细胞分化作用，为PRP应用于骨组织工程提供实验依据。方法从8只兔子双侧股骨大转子抽取骨髓，采用密度梯度离心法和传代筛选贴壁细胞的方法体外分离、培养兔BMSCs，并对所培养的细胞进行生长特性的观察。采用自身对照，将取得的第三代BMSCs分为实验组和对照组，实验组用1％PRP进行干预，对照组的培养液中加入地塞米松10-8mol／l，β-磷酸甘油钠（β-glycerophosphate，β-GP）10-3mol／l，维生素C 50 mg／l，倒置相差显微镜观察各组细胞形态及细胞增殖情况。通过倒置显微镜、碱磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）测定和茜素红钙结节染色等手段对获得的细胞进行生物学特性研究。结果1、原代培养细胞接种后见大量比较一致的圆形细胞24-36h后开始贴壁，贴壁细胞多呈多角形、椭圆形或梭形。48-72h时贴壁细胞呈短梭形或星形。4d时见细胞集落增殖数十个、上百个，中心部位细胞轮廓不清，周边细胞呈细梭形，向周围呈辐射状排列。6d时贴壁细胞大部分呈梭形，少部分细胞呈多角形，细胞接触紧密，部分区域融合成片。10-12d细胞融合成单层，呈典型细长梭形外观，集束状排列。随着培养时间继续延长，逐渐形成多个致密的岛状细胞结构，1月后形成钙化结节。2、实验组细胞培养第2天，已贴壁，贴壁细胞呈集落生长第3天，细胞呈细梭形，辐射状排列。第6天，细胞大部融合，细胞呈鱼群状排列。第10天，细胞大量增殖，细胞由梭形向多角形、方形转化，突起缩短。对照组细胞形态学变化较实验组晚出现1-3天。3、实验组以及对照组的ALP在第10天时ALP达到最高水平，随后出现下降趋势经过检验，各时间点实验组的ALP水平较对照组均明显升高（P＜0.05），差异具有统计学意义。茜素红钙结节染色后，在显微镜下，可以清晰的显示钙结节情况。ALP检测、茜素红钙结节染色显示采用本法在体外培养的兔成骨细胞生长良好，生化指标稳定，表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性。结论1、富血小板血浆具有促进体外培养的兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用。与传统的地塞米松、β-磷酸甘油钠、维生素C等诱导物相比，富血小板血浆的这一作用更显著。2、由于富血小板血浆具有采集方便、价格便宜、向成骨细胞分化能力强的特点，可能作为一种良好的诱导分化剂用于组织工程骨的基础与临床研究。

论文目录

• 一、摘要
• 中文论著摘要
• 英文论著摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 前言
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 四、本研究创新性的自我评价
• 五、参考文献
• 六、附录
• 综述
• 在学期间科研成绩
• 致谢
• 个人简介