A型肉毒毒素裂解SNAP-25在被川楝素阻断后仍抑制乙酰胆碱诱发离体幽门肌收缩

论文摘要

背景与目的：A型肉毒毒素（botulinum toxin type A.BTX-A）选择性地裂解突触相关蛋白—25（synaptosomal-associated protein of 25 kDa，SNAP-25），阻断突触囊泡中神经递质与突触前膜的融合、胞吐和释放。川楝素（toosendanin，TSN）近期被证实通过阻断BTX-A裂解SNAP-25而具有抗肉毒毒素功能。本研究依离体大鼠幽门平滑肌为实验对象，应用TSN阻断BTX-A裂解SNAP-25后，观察BTX-A是否仍对乙酰胆碱（acetylcholine，ACh）诱发的平滑肌收缩起抑制作用，以期揭示BTX-A对平滑肌存在的作用途径。方法：三组Sprague-Dawley大鼠的幽门离体平滑肌条在Krebs液中1g的前负荷下孵育52分钟左右，待出现自发性收缩波且平稳后分别加入ACh，BTX-A，TSN和Atropine。第一组（n=10）：肌条对ACh 1001μM出现反应10分钟后，分别加入Atropine 1μM（n=5）或BTX-A 10 U/ml（n=5）记录4小时；第二组（n=10）：肌条对BTX-A 10U/ml（n=5）或AtropinelμM（n=5）出现反应30分钟后，加入ACh 100μM记录4小时；第三组（n=5）：肌条在含TSN 29.6μM溶液中孵育20分钟后，加BTX-A10U/ml，30分钟后再加ACh 100μM记录4小时。结果：第一组：ACh 100μM显著地增强了幽门收缩的张力（P＜0.001）和频率（P＜0.001），但振幅无显著性差异；后续加入BTX-A 10 U/ml抑制了ACh诱发的收缩作用（张力，P＜0.001：频率，P＜0.001；振幅，P=0.014）。然而，Atropine 1μM却完全性抑制了ACh诱发的收缩反应。这一结果显示BTX-A10 U/ml直接抑制了ACh诱发的收缩反应。第二组：BTX-A 10 U/ml直接抑制了幽门自发性收缩（张力，P=0.006；频率，P＜0.001；振幅，P＜0.001）；AtropinelμM同样抑制了幽门肌的收缩。随后加入ACh100μM不能再激发幽门肌的收缩。第三组：TSN 29.6μM孵育20分钟，幽门平滑肌的自发性收缩末发生变化；加入BTX-A 10 U/ml后，BTX-A降低幽门肌收缩反应（张力，P＜0.001；振幅，P＜0.001）。虽然这种抑制作用与未加TSN时BTX-A的效应不尽相似，但是BTX-A10 U/ml仍然抑制了幽门平滑肌收缩，即使ACh 100μM也同样不能激发它再收缩。结论：A型肉毒毒素不仅抑制幽门平滑肌的自发性收缩，而且抑制了乙酰胆碱诱发的收缩；即使它介导SNAP-25裂解被川楝素阻断后，也同样抑制乙酰胆碱诱发的幽门部平滑肌收缩。这提示A型肉毒毒素不仅抑制胆碱能神经中乙酰胆碱的释放，而且抑制外源性乙酰胆碱与胆碱能毒蕈碱受体结合后产生的肌肉收缩反应。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• Table of abbreviations
• Introduction
• Materials and methods
• Animals
• Pyloric muscle strip preparation
• Experimental protocols
• Data analysis
• Results
• BTX-A inhibited ACh-induced pyloric muscle contractile response
• After BTX-A initially inhibiting pyloric muscle spontaneous contractility, sequential addition of ACh did not agitate anv more muscle contraction
• BTX-A inhibited ACh-induced contractile response following cleavage of SNAP-25 antagonized by toosendanin
• Discussion
• Conclusion
• References
• Papers written during the master's degree
• 致谢