论文摘要
复方0326是我室自行研制的中药复方，经初步药理学试验具有一定抗艾滋病、抗肿瘤活性，并能提高机体免疫力。本课题选用本复方为研究对象，以抗艾滋病效果为评价指标，以HPLC指纹图谱分析方法为主，对复方颗粒剂进行质量控制研究。本复方中药由当归、蛇床子、白及、黄连四味药材组成，主要指标性成分为阿魏酸、蛇床子素、黄连素、多糖等。主要研究内容及结果如下：提取方法：固定提取条件，先将四味中药分别提取，计算提取率，解决中药复方在提取过程中提取率波动引起的含量变化导致药效不稳定的问题。当归、黄连、蛇床子三味中药分别采用60％乙醇回流提取，再用水煮提，白及采用渗漉法提取。有效成分HPLC指纹图谱及含量测定：根据提取率计算各药材成分用量，制成复方颗粒剂，可更有效地控制本制剂的内在质量。建立各有效成分含量测定方法，并应用HPLC方法，建立了复方抗艾颗粒剂的HPLC指纹图谱分析方法，复方指标性成分进行定性定量控制，方法简便、准确、重复性好，为其质量控制提供了更全面的信息。鉴于本复方由脂溶性成分和水溶性成份组成，水溶性有效成分以多糖为主，因此水溶性成分采用硫酸苯酚法，对其多糖成分进行定性定量控制。经测定，水溶性成分中，多糖含量为25.7％。脂溶性成分用70％甲醇溶解，采用HPLC指纹图谱分析方法对复方进行定性定量控制。经过对三药材组分紫外扫描，确证在315nm均有较大吸收，确定HPLC检测波长为315nm。并经过多次探索，确定洗脱系统为乙腈—0.1％三乙胺和25mmol／LKH2PO4水溶液（磷酸调PH到3）。75min内可使全部色谱峰流出，且大部分得到基线分离。梯度条件为0～20min乙腈体积分数由10增至25；25～35min乙腈体积分数由35增至45；60～75min乙腈体积分数由45增至75。检测波长315nm；柱温25℃；体积流量1.0ml／min；进样体积为20μl。根据峰面积计算指标性成分阿魏酸、蛇床子素、黄连素含量，阿魏酸含量均数为0.5795，RSD值为0.84％，蛇床子素含量均数为26.97，RSD值为0.60％，黄连素含量均数为25.738，RSD值为0.29％。三种成分含量RSD值均小于5％，可见批内检测精密度较高，检测方法重复性较好。生物活性研究部分进行体外抗艾滋病病毒活性研究、体外抑菌实验研究、人体肿瘤细胞的细胞毒试验以及体内抗肿瘤活性研究等研究内容，验证了复方0326对HIV-1逆转录酶有一定的抑制作用。进一步药理研究表明复方0326对真菌有一定的抑菌能力；抗肿瘤实验结果显示低剂量组具有明显的抑制小鼠移植性肿瘤H22的作用。对体外培养的人肺腺癌A549细胞有一定的细胞毒作用，对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长有较强的细胞毒作用；具有良好的应用前景。内容具有新颖性、实用性和可行性，该研究对复方0326的深入研究开发具有十分重要的意义。