论文题目: 两种猪源链球菌纤连蛋白体外结合的特征
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 孙理云
导师: 陆承平
关键词: 猪链球菌型,马链球菌兽疫亚种,表面疏水性,纤连蛋白,体外结合,纤连蛋白,血纤蛋白原结合蛋白,纤连蛋白结合部位
文献来源: 南京农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 猪链球菌是集约化养猪场的重要的病原之一。迄今为止,发现有35个血清型。猪链球菌2型（Streptococcus suis 2,SS2）被认为是毒力最强的。马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SEZ）可感染猪、马、犬、羊、鸡、猫及奶牛,在兽医方面具有重要的意义。上述两种菌均是人兽共患病病原,也是我国猪链球菌病的主要病原。 细菌表面的疏水性是细菌重要的理化特性,与细菌表面组成物质有很大关系,一定程度上与细菌的致病性有关。 纤连蛋白（fibronectin,Fn）是由α和β链组成的一种二聚体糖蛋白,相对分子质量（Mr）约450kD,由多种类型的细胞表达产生,在动物体内两种存在方式,一种游离存在于血浆中,一种以纤维状存在于细胞外基质（ECM）;α与β链中均含有Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型三种重复序列;整合素、肝素、胶原/明胶和血纤蛋白都与Fn结合,位置各不相同。细菌表面的Fn结合蛋白在Fn上有不同的结合位置。 业已证明化脓性链球菌黏附宿主细胞的机制之一是结合Fn,进而定植和侵袭宿主。细菌表面的Fn结合蛋白与ECM的Fn的结合促进上皮细胞内化链球菌。细菌与体液中的游离Fn结合在细菌逃避宿主的免疫防御方面也有重要意义。 SEZ和SS2均有Fn结合蛋白基因,但二种细菌与游离（free）及固定（immobilized）Fn体外结合情况如何,未见报道。采用盐析法测定SEZ ATCC35246株（简称ATCC35246）和SS2江苏分离株HA9801（简称HA9801）的表面疏水性,ATCC35246在浓度为1.0M的硫酸铵溶液中2 min内析出,HA9801在0.6M的硫酸铵溶液中析出。用不同浓度的人Fn包被ELISA板,采用ELISA检测对数生长后期的ATCC35246和HA9801体外结合固定Fn的情况,ATCC35246的OD415随细菌浓度的升高而增大,108CFU/ml达到饱和浓度,而HA9801的OD415与结合BSA对照值相比,经t检验差异不显著（p>0.05）。同时采用间接免疫荧光方法（IFA）,检测体外结合游离的人Fn的情况,在荧光显微镜下可发现两种细菌周围有绿色荧光。结果表明二菌均为表面疏水菌:ATCC35246既可结合固定的Fn,又结合游离的Fn;而HA9801仅与游离的Fn结合。 用不同pH值的PBS稀释对数生长后期的ATCC35246成不同浓度,将其加入用不同浓度的人纤连蛋白（Fn）包被好的ELISA板,加入兔ATCC35246血清与结合在Fn上的细菌作用后,加入1:2,000稀释的碱性磷酸酶标记的山羊抗兔IgG,作用1h后
论文目录:
全文摘要
英文摘要
文献综述
第1章 纤连蛋白概述
第2章 猪链球菌2型国外研究进展
试验部分
第3章 两种猪源链球菌菌体细胞表面疏水性及体外结合纤连蛋白的检测
1 材料与方法
2 结果
3 讨论
4 参考文献
第4章 pH对马链球菌兽疫亚种ATCC35246株体外结合固定纤黏蛋白的影响
1 材料与方法
2 结果
3 讨论
4 参考文献
第5章 猪链球菌2型江苏分离株的纤连蛋白／纤维蛋白原结合蛋白基因的克隆及序列分析
1 材料与方法
2 结果
3 讨论
4 参考文献
第6章 猪链球菌2型全长fbps及部分片段融合表达载体的构建与表达
1 材料与方法
2 结果
3 讨论
4 参考文献
第7章 FBPS和Fn相互作用部位的确定
1 材料与方法
2 结果
3 讨论
4 参考文献
全文总结
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论
发布时间: 2005-07-19
参考文献
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