内蒙古绒山羊不同时期皮肤中相关基因差异表达及原位杂交的研究

论文摘要

山羊绒是高档的纺织原料,由绒山羊皮肤次级毛囊产生,皮肤和毛囊的结构特征对绒毛产量和品质有直接重要的影响。通过对内蒙古白绒山羊(阿尔巴斯型)和辽宁绒山羊皮肤毛囊形态结构周期性变化的统计观察表明,二者毛囊周期性变化基本相同,初次级毛囊形态结构的周期性变化也基本相似,但周期并不相同,而且皮肤的表皮也呈周期性变化;毛囊的重建是从上皮细胞与间叶细胞的连接开始,次级毛囊在重建过程中是成群出现的,并且各性状的高峰大都落后初级毛囊一个月。初级毛囊除毛球宽外,其它各性状内蒙古白绒山羊均大于辽宁绒山羊,而次级毛囊各性状辽宁绒山羊都大于内蒙古白绒山羊,在大多数月份二者差异显著。毛囊深、密度、S/P、毛球宽和生长速度是影响绒山羊产绒量的因素。用抑制性消减杂交技术成功构建了内蒙古白绒山羊胚胎期和兴盛期皮肤毛囊的消减cDNA文库。从两个文库中分别随机挑取50个克隆测序分析,测序结果经Genbank同源性比对表明在胚胎期消减cDNA文库中得到15个特异表达基因片段,包含一个未知新序列;在兴盛期消减cDNA文库得到19个特异表达基因片段,包含2个未知新序列。我们挑取胚胎期特异表达的7个基因在胚胎期75、85、95、105、115、135天胎儿皮肤中进行原位杂交,发现他们大部分在毛囊的外根鞘中表达。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1 毛囊概述
• 1.1 毛囊的基本结构
• 1.2 毛囊的发育及调控
• 1.3 毛囊的周期性变化
• 1.3.1 兴盛期向休止期转化的分子调控
• 1.3.2 退行期细胞死亡和存活的分子调控
• 兴盛期转化）开始的分子机制'>1.3.3 控制出生后毛囊生长期（退行期^兴盛期转化）开始的分子机制
• 1.4 绒毛的结构蛋白
• 2 我国绒山羊概况
• 2.1 绒山羊主要品种及特征
• 2.2 我国绒山羊毛被特点
• 2.3 我国绒山羊生产的重要意义
• 3 绒山羊毛囊研究现状
• 3.1 毛囊周期性变化调控的研究
• 3.2 毛囊性状研究进展
• 3.3 毛囊组成蛋白研究进展
• 4 绒山羊育种展望
• 第二章 绒山羊皮肤毛囊周期性变化的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 样品的采集
• 1.1.2 药品和仪器
• 1.1.3 溶液的配制
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 石蜡切片的制备
• 1.2.2 统计方法
• 1.2.3 皮肤缩率的校正
• 2 结果与分析
• 2.1 绒山羊皮肤毛囊性状统计结果
• 2.1.1 纵切切片的统计结果
• 2.1.2 皮肤横切切片统计结果
• 2.2 绒山羊皮肤毛囊组织学观察
• 2.2.1 皮肤毛囊的结构
• 2.2.2 皮肤表皮的周期性变化
• 2.2.3 毛囊群的周期性变化
• 2.2.4 毛囊横切的周期性变化
• 2.2.5 毛囊纵切的周期性变化
• 3 讨论
• 3.1 关于绒山羊毛囊的周期
• 3.2 表皮和毛囊的形态学变化
• 3.3 毛囊性状及周期性变化与产绒量
• 4 结论
• 第三章 内蒙古白绒山羊成年与胚胎期皮肤消减杂交
• 1 材料
• 1.1 样品的采集
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 主要溶液及试剂配制
• 1.5 序列分析与比对
• 2 实验步骤
• 2.2
• 2.2.1 总 RNA 抽提
• 2.2.2 MRNA 纯化
• 2.2.3 CDNA 反转录
• 2.2.4 CDNA RSAI 酶切
• 2.2.5 接头连接
• 2.2.6 差减杂交
• 2.2.7 差减文库扩增
• 2.2.8 差减文库克隆鉴定
• 2.2.9 斑点杂交
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 总 RNA 提取质量的检测
• 2.3.2 MRNA 纯化产物的检测
• 2.3.3 CDNA 反转录其RSAI 酶切结果
• 2.3.4 CDNA 消减文库扩增
• 2.3.5 CDNA 消减文库中克隆的序列鉴定
• 3 讨论
• 3.1 抑制性消减杂交技术
• 3.2 成年绒山羊皮肤中特异表达基因
• 3.3 绒山羊胚胎皮肤中特异表达基因
• 4. 结论
• 第四章 胚胎期特异表达的相关基因在毛囊中的原位杂交研究
• 1 材料
• 1.1 样品、实验菌种及质粒载体
• 1.2 引物设计
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器设备
• 1.5 主要溶液及试剂配制
• 2 实验步骤
• 2.1 载玻片的预处理
• 2.1.1 载玻片的酸洗
• 2.1.2 用粘附剂处理载玻片
• 2.2 制备探针
• 2.2.1 质粒DNA 的提取
• 2.2.2 PCR 反应
• 2.2.3 探针的体外转录
• 2.3 原位杂交
• 2.3.1 皮肤组织切片的制备
• 2.3.2 组织切片的预处理
• 2.3.3 杂交及杂交后洗涤
• 2.3.4 显色
• 3 结果与分析
• 3.1 探针制备
• 3.2 原位杂交结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介