Ezrin在胰腺癌侵袭转移中的作用及黄芩素对其表达的影响

论文摘要

目的探讨Ezrin在胰腺癌组织中的表达及其在胰腺癌恶性进展中的作用。并通过观察黄芩素对PANC-1细胞Ezrin表达的影响,探讨黄芩素抗肿瘤作用的可能机制。方法收集1997年2月～2005年9月中南大学湘雅医院和河南大学淮河医院手术切除的46例胰腺癌石蜡包埋组织标本及同期其他手术切除的13例正常胰腺石蜡包埋组织标本,运用免疫组织化学染色（SABC）方法观察Ezrin在胰腺癌组织的表达情况,并分析其表达与胰腺癌临床病理因素和预后的关系。体外培养人胰腺癌PANC-1细胞,通过化学合成的小干扰RNA（siRNA）下调人胰腺癌PANC-1细胞Ezrin表达后,运用MTT法、流式细胞仪、划痕愈合实验（Wound healing assay）、扫描电镜和侵袭小室实验（Transwell assay）等方法,观察肿瘤细胞增殖、细胞周期、伪足形成、侵袭和迁移能力的改变。并用Western Blot和RT-PCR检测黄芩素干预后肿瘤细胞Ezrin蛋白、磷酸化Ezrin蛋白及EzrinmRNA表达的变化。结果免疫组织化学染色显示胰腺癌组织中Ezrin阳性表达率为89.1%（41/46）,其中,强阳性表达率为45.7%（21/46）,正常胰腺组织中Ezrin阳性表达率为53.8%（7/13）。癌组织中阳性表达率显著高于正常胰腺组织（P=-0.009,Fisher精确检验）。Ezrin强阳性表达率随肿瘤分化程度的降低而增高（x2=7.725,P=0.021）;有淋巴结转移者Ezrin强阳性表达率显著高于无淋巴结转移者（x2=3.989,P=0.046）,但其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期无关。值得注意的是Ezrin在淋巴管或血管癌栓组织中均呈强阳性表达。Ezrin强阳性表达组术后中位生存时间为16个月（9～36个月）,Ezrin呈弱阳性及阴性表达组术后中位生存时间为24个月（8～50个月）,经log-rank检验,两组差异有显著意义（x2=4.860,P=0.0276）。Western印迹结果显示,Ezrin siRNA对Ezrin蛋白表达水平有显著的下调作用。下调Ezrin蛋白后,PANC-1细胞增殖明显被抑制,G2/M期细胞显著降低（P＜0.05）;同时伴随着S期细胞减少,而G0/G1期增加,细胞伪足形成显著减少,肿瘤细胞的运动侵袭能力下降,穿过人工基底膜的细胞数量明显减少,与干扰前比较差异有统计学意义（P＜0.01）,但未观察到RNA干扰对细胞凋亡有影响。黄芩素对PANC-1细胞增殖的抑制作用随时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用逐渐增强,呈明显的时间和剂量依赖性;WesternBlot和RT-PCR结果显示,黄芩素明显降低Ezrin、磷酸化Ezrin及Ezrin-mRNA在PANC-1细胞中的表达,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论1、Ezrin在胰腺癌组织中存在过表达,且其表达水平与胰腺癌侵袭转移和预后密切相关,提示Ezrin可以作为反映胰腺癌预后的一种有价值的分子标志物。2、siRNA下调Ezrin蛋白表达后,对胰腺癌细胞的恶性增殖、侵袭和迁移能力具有明显抑制作用。提示该分子可能成为抑制胰腺癌侵袭转移的靶点。3、黄芩素呈剂量和时间依赖性抑制胰腺癌细胞增殖,而且明显下调Ezrin-mRNA和Ezrin蛋白表达及其磷酸化活化。提示黄芩素可通过抑制Ezrin表达及活化从而抑制肿瘤细胞恶性增殖、侵袭和迁移能力,可能成为抗肿瘤治疗的新的药物。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 本文主要英汉缩略语名词对照表
• 前言
• 第一章 Ezrin蛋白在胰腺癌组织中的表达及意义
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 第二章 小干扰 RNA（siRNA）下调 Ezrin表达对人胰腺癌 PANC-1细胞增殖、侵袭和运动能力的影响
• 1. 材料和方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 第三章 黄芩素对人胰腺癌 PANC-1细胞 Ezrin表达及活性的影响
• 1. 材料和方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文