癞葡萄皂苷及其降血糖功能研究

论文摘要

癞葡萄（Momordica Charantia L. Var. abbreviate Ser）为葫芦科（Cucurbitaceae）苦瓜属植物苦瓜的一个变种。癞葡萄具有明显的降血糖功效,经研究,癞葡萄皂苷是其主要的降血糖活性成分之一。本文旨在研究癞葡萄皂苷的提纯工艺,为工业化生产提供借鉴。在此基础上,研究了癞葡萄皂苷的结构组成,探索了癞葡萄皂苷元的水解方法,得到了初步的苷元组成,对比了皂苷元与皂苷的降血糖活性。对癞葡萄皂苷单体进行了分离纯化和结构鉴定。首先,对癞葡萄皂苷的提纯工艺进行了系统研究,通过静态吸附、动态吸附以及动态洗脱实验,确定了大孔吸附树脂AB-8分离纯化癞葡萄皂苷的最佳工艺条件为:上样液浓度为5-5.5mg·mL-1,上样液pH值为5,上样液盐浓度（KCl）为9mg·mL-1,上样液流速为2Bv·h-1,用乙醇进行梯度洗脱,收集不同梯度下乙醇的洗脱液,可得到初步分离的癞葡萄皂苷组分。直接用95%的乙醇洗脱,洗脱液流速为2Bv·h-1,收集4个柱体积,可得到纯化的癞葡萄总皂苷,得率可达90.1%,皂苷纯度为77.8%。采用C18填料进一步分离纯化,得到了一种癞葡萄皂苷单体,经核磁共振谱图分析,推测其为葫芦烷-5-烯-3β,22,23,24,25-四羟基-3-O-3-β-D-吡喃葡萄糖（1→6）-D-吡喃葡萄糖苷。为了进一步得到癞葡萄皂苷的结构组成,本文对癞葡萄皂苷元进行了初步研究。确定了癞葡萄皂苷元的检测方法,比较了皂苷元不同的水解方法,采用直接酸水解法可得到纯度较高（苷元百分含量为75.6%）的癞葡萄皂苷元。通过液相色谱串联质谱分析（LC/MS）,检测出六种主要的皂苷元组成,其中三种皂苷元的分子量与已报道的苦瓜皂苷元Ⅰ、齐燉果酸以及β,7β,23-trihydroxy-cucurbita-5,（23E）-dien-19-al的分子量相同,一种皂苷元与后续分离纯化得到的皂苷单体的苷元分子量相同。TLC法快速检测癞葡萄皂苷元结果显示,癞葡萄皂苷元的最佳展开剂条件为:氯仿:石油醚在1.5:8.5-2.5:7.5之间,得到了比较清晰的六条苷元条带,与LC/MS分析结果一致。癞葡萄皂苷及皂苷元的降血糖活性实验比较发现,以200mg/kg体重的癞葡萄皂苷水溶液灌胃糖尿病小鼠,可以在4h内使小鼠血糖值下降26.8%,连续灌胃5d后,使小鼠血糖值下降58.4%,而同样条件下,癞葡萄皂苷元却并未表现出降血糖活性,表明苷元不存在降血糖活性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 癞葡萄与苦瓜的概述
• 1.2 苦瓜主要研究进展
• 1.2.1 苦瓜中主要活性成分的研究进展
• 1.2.2 苦瓜的药用价值
• 1.3 癞葡萄研究进展
• 1.3.1 癞葡萄的化学成分组成
• 1.3.2 癞葡萄水提物及多肽的研究
• 1.3.3 癞葡萄皂苷的研究
• 1.4 皂苷及皂苷元概述
• 1.4.1 皂苷及皂元的结构
• 1.4.2 苦瓜皂苷研究进展概述
• 1.5 立题依据和主要研究内容
• 1.5.1 立题依据和意义
• 1.5.2 主要研究内容
• 第二章 癞葡萄皂苷的大孔树脂纯化工艺研究
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料与仪器
• 2.2.1 实验材料与试剂
• 2.2.2 仪器与设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 癞葡萄皂苷的测定方法
• 2.3.2 癞葡萄粗皂苷的提取与制备
• 2.3.3 癞葡萄皂苷供试液的制备
• 2.3.4 大孔树脂的预处理
• 2.3.5 树脂的选择
• 2.3.6 大孔树脂对癞葡萄皂苷的静态吸附实验
• 2.3.7 大孔树脂的动态吸附实验
• 2.3.8 大孔树脂的动态洗脱实验
• 2.3.9 大孔树脂的再生
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 大孔树脂对癞葡萄皂苷的静态吸附实验
• 2.4.2 大孔树脂对癞葡萄皂苷的动态吸附实验
• 2.4.3 大孔树脂对癞葡萄皂苷的动态洗脱实验
• 2.4.4 验证性实验
• 2.5 本章小结
• 第三章 癞葡萄皂苷的分离纯化及其结构鉴定
• 3.1 引言
• 3.2 材料与仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 癞葡萄皂苷的分离纯化
• 3.3.2 癞葡萄皂苷的定性检测（TLC 法）
• 3.3.3 癞葡萄皂苷的纯度检测
• 3.3.4 癞葡萄皂苷的结构鉴定
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 TLC 法
• 3.4.2 HPLC 法测定纯度
• 3.4.3 癞葡萄皂苷的ESI-MS 分析结果
• 3.4.4 癞葡萄皂苷的磁核共振数据及其结构鉴定
• 3.5 本章小结
• 第四章 癞葡萄皂苷元的提取与检测
• 4.1 引言
• 4.2 材料与仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 癞葡萄皂苷元检测标准曲线的建立
• 4.3.2 皂苷元的水解
• 4.3.3 LC/MS 法对癞葡萄皂苷元的分析
• 4.3.4 TLC 法快速检测癞葡萄皂苷元初探
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 癞葡萄皂苷元标准曲线的测定
• 4.4.2 癞葡萄皂苷水解方法的选择
• 4.4.3 LC/MS 分析癞葡萄皂苷元
• 4.4.4 TLC 法快速检测癞葡萄皂苷元条件初探
• 4.5 本章小结
• 第五章 癞葡萄皂苷及皂苷元的降血糖活性研究与比较
• 5.1 引言
• 5.2 实验材料与仪器
• 5.3 试验方法
• 5.3.1 取血及测定方法
• 5.3.2 四氧嘧啶型糖尿病小鼠模型的建立
• 5.3.3 实验小鼠的分组
• 5.3.4 癞葡萄皂苷和皂苷元对四氧嘧啶型小鼠血糖值的影响
• 5.3.5 连续治疗5 天癞葡萄皂苷及皂苷元对正常小鼠及四氧嘧啶小鼠血糖值的影响
• 5.3.6 小鼠糖耐量的测定
• 5.3.7 统计方法
• 5.4 结果与讨论
• 5.4.1 糖尿病小鼠动物模型的建立
• 5.4.2 皂苷及皂苷元对糖尿病小鼠的影响
• 5.4.3 连续灌胃5d 后癞葡萄皂苷及皂苷元对小鼠血糖值的影响
• 5.4.4 癞葡萄皂苷及皂苷元对小鼠糖耐量实验的结果
• 5.4.5 糖尿病小鼠在治疗过程中体重和饮食的变化
• 5.5 本章小结
• 主要结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附图