论文题目: 丙型肝炎病毒核心蛋白和NS5A蛋白对NF-κB的激活研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物学
作者: 廖庆姣
导师: 叶林柏
关键词: 丙型肝炎病毒,核心蛋白,非结构蛋白,协同作用,冠状病毒,核衣壳蛋白
文献来源: 武汉大学
发表年度: 2005
论文摘要: 丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙型肝炎的病原体,HCV感染常常导致慢性持续性感染,最终导致肝硬化甚至肝癌,但关于其致病及宿主免疫防御机制还不是很清楚。核因子κB(NF-κB)是一种重要的细胞核转录因子,能调节大量基因特别是免疫应答和炎症反应相关基因的转录,在许多免疫和炎症反应的调节中起着重要作用,同时也影响着细胞的生长、分化、凋亡、癌变和个体发育等,功能涉及到许多生理、病理过程。 本论文研究了HCV的Core和NS5A两种蛋白与NF-κB信号途径的关系,目的是探索HCV致病的分子机制。 首先我们构建了core基因的重组真核表达质粒pcDNA-△core519、pcDNA-△core474、pcDNA-△core(76-573)、pcDNA-△core(76-474)和NS5A基因的重组表达质粒p3NS5A,将各个重组质粒单独与NF-κB报告质粒pNF-κB-Luc或是将core基因质粒和p3NS5A混合后与报告质粒共转染转染Cos-7、HeLa和Huh7三种细胞系,检测它们对NF-κB活性的影响,同时用Western-blot和间接免疫荧光实验检测了蛋白的表达定位情况。虫荧光素酶实验表明Core蛋白能够在Huh7细胞中激活NF-κB,且其N端1-25氨基酸为其NF-κB激活功能所必需的,其C端的疏水性区域对其NF-κB激活功能也有一定的影响;Core蛋白在Huh7细胞中对NF-κB的激活作用是剂量依赖性的。但Core蛋白在Cos-7和HeLa细胞中对NF-κB活性没有明显影响,表明Core蛋白对NF-κB激活是有细胞选择性的;NS5A蛋白单独在三种细胞系中对NF-κB活性都没有影响,但它能增强全长Core蛋白在Huh7细胞中对NF-κB的激活作用,但对缺失的Core蛋白的突变体没有增强作用,表明NS5A只能和全长Core蛋白作用;并且NS5A蛋白对Core蛋白对NF-κB激活的增强作用与NS5A的蛋白量在一定范围内呈相关性。 同时用Westem-blot检测了Core蛋白和NS5A蛋白在Huh-7细胞系中单独或共表达时NF-κB/p65,NF-κB/p50和IκB-α三种NF-κB相关因子的表达情况。结果表明Core蛋白和NS5A蛋白的表达没有提高NF-κB蛋白表达水平,而是引起了IκB-α的降解,推测其引起的NF-κB的激活是由与促进IκB-α磷酸化从而被降解而导致的。 我们的研究结果表明NS5A蛋白对Core蛋白激活NF-κB具有协同作用,HCV
论文目录:
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英文摘要
第一部分 丙型肝炎病毒核心蛋白和NS5A蛋白对NF-κB的激活研究
第一章 丙型肝炎病毒分子生物学
1.1 丙型肝炎的流行病学
1.1.1 世界丙型肝炎流行状况
1.1.2 我国丙型肝炎流行状况
1.1.3 丙型肝炎传播途径
1.2 HCV分型
1.3 HCV的分子生物学特征
1.3.1 5’非翻译区(5’UTR)
1.3.2 3’非翻译区(3’UTR)
1.3.3 结构蛋白E1，E2，p7
1.3.4 非结构蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B和NS5B
1.3.5 Core蛋白
1.3.6 NS5A蛋白
1.4 研究HCV的模型系统
1.4.1 动物模型
1.4.2 细胞培养系统——复制子(replicon)系统
第二章 NF-κB信号转导途径
2.1 NF-κB及其相关分子
2.1.1 NF-κB／Rel家族
2.1.2 NF-κB的抑制蛋白——IκB(Inhibitors of NF-κB)
2.1.3 IκB激酶(IκB kinase，IKK)
2.1.4 IKK的上游激酶
2.2 NF-κB活化的分子机制
2.2.1 NF-κB活化的经典途径
2.2.2 NF-κB活化的旁路途径
2.2.3 NF-κB信号转导途径的调节
2.2.4 NF-κB活化的上游信号转导途径
2.3 NF-κB的生物学意义
2.3.1 NF-κB与免疫炎症反应
2.3.2 NF-κB与细胞的增殖及分化
2.3.3 NF-κB与细胞周期调控
2.3.4 NF-κB与肿瘤
2.3.5 NF-κB与细胞凋亡
第三章 HCV core和NS5A重组真核表达载体的构建及其在细胞中的表达
3.1 材料和方法
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验方法
3.2 实验结果
3.2.1 core基因及其缺失突变体的重组真核表达载体的鉴定
3.2.2 NS5A的重组真核表达载体的鉴定
3.2.3 Core蛋白及各缺失突变体和NS5A蛋白在HeLa细胞中的表达
3.2.4 Core蛋白及各缺失突变体和NS5A蛋白的表达量与转染质粒量的关系
3.3 讨论
第四章 HCV Core蛋白对NF-κB的激活研究
4.1 材料和方法
4.1.1 实验材料
4.1.2 实验方法
4.2实验结果
4.2.1 Core蛋白及其突变体在Cos-7细胞中的定位
4.2.2 Core蛋白在Huh7细胞中对NF-κB的有激活作用
4.2.3 Core蛋白N端对NF-κB的激活作用是关键的
4.2.4 Core蛋白及其突变体对NF-κB的激活作用是剂量依赖性的
4.2.5 Core蛋白对NF-κB的激活源于IκB的降解
4.3 讨论
第五章 NS5A蛋白增强全长Core蛋白诱导的NF-κB的激活
5.1 材料和方法
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验方法
5.2 实验结果
5.2.1 Core蛋白和NS5A蛋白在Cos-7细胞中的定位
5.2.2 NS5A蛋白在检测细胞中对NF-κB的没有明显的激活作用
5.2.3 NS5A蛋白增强全长Core蛋白在Huh7细胞中对NF-κB的激活作用
5.2.4 NS5A蛋白对Core蛋白的协同作用与NS5A蛋白的量相关
5.2.5 NS5A蛋白增强Core蛋白对NF-κB的激活作用源于IκB的降解
5.3 讨论
第一部分 研究总结
参考文献
第二部分 SARSN蛋白对NF-κB的激活作用
第六章 SARSN蛋白对NF-κB的激活作用
6.1 前言
6.2 材料与方法
6.2.1 实验材料
6.2.2实验方法
6.3 实验结果
6.3.1 N蛋白及各种缺失突变体在细胞中的表达鉴定
6.3.2 在Vero E6中对NF-κB有激活作用
6.3.3 N蛋白激活NF-κB的功能区的确定
6.4 讨论
6.5 研究总结
6.6 参考文献
在读期间发表和待发表论文
致谢
发布时间: 2006-03-27
参考文献
- [1].草鱼NF-κB信号通路激活及其调控的分子机制[D]. 王海舟.南昌大学2017
- [2].NF-κB信号传导通路和自噬在神经干细胞分化中的作用[D]. 张丽.苏州大学2008
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- [4].针刺对慢性萎缩性胃炎模型大鼠NF-κB转导系统影响的研究[D]. 钟国新.广州中医药大学2014
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- [6].牛泡沫病毒通过活化细胞NF-κB信号通路促进其转录及复制[D]. 王健.南开大学2010
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- [10].NF-κB信号通路在七氟烷预处理对大鼠心肌缺血保护机制中的作用[D]. 王琛.苏州大学2011
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