A23187诱导蓝狐精子顶体反应的研究

论文摘要

精子顶体反应（acrosome reaction,AR）是动物受精的前提,精子顶体反应的研究对动物繁殖的理论与实践都具有重要意义。本研究以蓝狐（Alopex lagopus）为实验动物,对钙离子载体A23187（calcium ionophore A23187,IA）诱导蓝狐精子顶体反应作用效果进行研究;通过实验筛选A23187诱导蓝狐精子顶体反应的适宜浓度和最佳作用时间。讨论A23187溶剂——二甲基亚砜（DMSO）对未获能精子和获能精子的顶体反应率和活率的影响。根据报道和预实验结果,本研究设计了9个A23187作用浓度和6个DMSO作用浓度。同时讨论了牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）的存在对A23187诱导蓝狐精子顶体反应作用效果的影响。本研究利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体状态并考察顶体反应率,伊红-苯胺黑染色检测死活精子比率,通过以上两种指标对实验结果进行评价。实验结果表明:1、0.1%,0.2%,0.5%浓度的DMSO对未获能蓝狐精子顶体反应率及活率在2小时内无显著影响。随着DMSO浓度的上升蓝狐精子的活率显著下降（P＜0.05）。2、0.1%,0.2%,0.5%浓度的DMSO对已进行获能处理的蓝狐精子顶体反应有促进作用。高浓度DMSO使获能蓝狐精子活率明显降低（P＜0.05）。3、蓝狐精子体外获能及顶体反应实验中,DMSO的浓度应控制在0.5%以下。4、A23187可提高获能蓝狐精子的顶体反应率,A23187对于蓝狐精子最适宜的作用浓度为5μmol/L;处理时间以7分钟为宜。5、A23187对未获能蓝狐精子顶体反应诱导作用不明显（P＞0.05）。6、BSA的存在,对A23187诱导蓝狐精子顶体反应效果影响不显著（P＞0.05）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 精子获能的发现
• 1.3 影响精子体外获能的因素
• 1.3.1 温度
• 1.3.2 pH值
• 1.3.3 渗透压
• 1.3.4 动物种类
• 1.3.5 采精部位
• 1.3.6 湿度
• 1.3.7 气相条件
• 1.3.8 培养液组成成分
• 1.4 精子体外获能的方法
• 1.4.1 精子的洗涤
• 1.4.2 精子的获能处理
• 1.5 顶体反应（AR）
• 1.5.1 顶体的结构
• 1.5.2 顶体反应
• 1.5.3 顶体反应的机制
• 1.5.4 顶体反应的诱导因子
• 1.6 顶体反应评价方法
• 1.6.1 考马斯亮蓝法
• 1.6.2 金霉素荧光染色法
• 1.6.3 三色染色法
• 1.6.4 透射电镜法
• 1.7 A23187诱导精子顶体反应研究进展
• 1.8 研究目的及意义
• 2 材料方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂
• 2.4 获能培养液的配制
• 2.4.1 BO基础液的配制
• 2.4.2 洗精液配制
• 2.4.3 获能液配制
• 2.4.4 染色液及缓冲液的配制
• 2.4.5 A23187的配制
• 2.5 实验设计
• 2.5.1 上游法洗精
• 2.5.2 精子获能处理
• 2.5.3 DMSO浓度对未获能精子的影响
• 2.5.4 DMSO浓度对获能精子的影响
• 2.5.5 A23187浓度对诱导精子顶体反应的影响
• 2.5.6 A23187作用时间对诱导精子顶体反应的影响
• 2.5.7 A23187诱导未获能精子顶体反应
• 2.5.8 BSA对A23187诱导精子顶体反应影响
• 2.6 顶体反应及精子活率的检测
• 2.6.1 考马斯亮蓝染色法
• 2.6.2 伊红-苯胺黑染色法
• 2.7 数据统计方法
• 2.8 本章小结
• 3 实验结果
• 3.1 二甲基亚砜对未获能精子的影响
• 3.1.1 二甲基亚砜对未获能精子活率的影响
• 3.1.2 二甲基亚砜对未获能精子顶体反应率的影响
• 3.2 二甲基亚砜对获能精子的影响
• 3.2.1 二甲基亚砜对获能精子活率的影响
• 3.2.2 二甲基亚砜对获能精子顶体反应率的影响
• 3.3 A23187浓度对精子顶体反应的影响
• 3.4 A23187作用时间对精子顶体反应的影响
• 3.5 A23187对未获能蓝狐精子顶体反应的影响
• 3.6 BSA存在对A23187诱导蓝狐精子顶体反应影响
• 3.7 本章小结
• 4 分析与讨论
• 4.1 DMSO对蓝狐精子顶体反应的影响
• 4.1.1 二甲基亚砜对未获能精子活率的影响
• 4.1.2 二甲基亚砜对未获能精子顶体反应的影响
• 4.1.3 二甲基亚砜对获能后精子活率和顶体反应率的影响
• 4.2 A23187对蓝狐精子顶体反应影响
• 4.2.1 A23187浓度和作用时间对蓝狐精子顶体反应的影响
• 4.2.2 A23187诱导未获能精子顶体反应效果
• 4.2.3 BSA存在对A23187诱导蓝狐精子顶体反应的影响
• 4.3 精子顶体反应中的形态学变化
• 4.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢