夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟及体外受精技术的优化研究

论文摘要

本文研究了夏季乏情季节晋中绵羊卵母细胞体外成熟培养及体外受精的优化,目的是建立一套完善的绵羊胚胎体外生产体系,为该技术走出实验室,在实践中得以应用提供理论依据。 本研究共分两个实验,实验一研究了绵羊卵母细胞体外成熟的培养方法、在成熟液中添加不同浓度的激素、以及卵巢运输温度和卵母细胞体外成熟的培养时间对晋中绵羊卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,夏季乏情季节,绵羊卵巢的运输温度为35～38℃时与20～25℃、25～35℃相比,可显著提高绵羊卵母细胞的体外成熟率和卵裂率（69.57% vs 50.85%vs 67.81%,67.19% vs 38.33% vs 44.07%）。在成熟培养液中添加浓度为12μg/ml的FSH、10μg/ml的LH和1μg/ml E2时,晋中绵羊卵母细胞第一极体的排放率显著提高。使用平皿法（培养液体积为500μl,每个皿内放50～60个卵母细胞,不覆盖石蜡油）用于绵羊卵母细胞体外成熟培养,其成熟率和卵裂率与微滴法相比（71.71% vs 65.03%,66.06% vs 64.71%）,差异不显著,所以在相同效果的前提下可大大降低成本。选用胞质均一致密,外围至少有3层以上卵丘细胞包裹的A级卵母细胞,成熟培养27h与20h和24h相比可显著提高晋中绵羊卵母细胞体外培养的卵裂率（68.64% vs 51.01% vs 44.12%）。 实验二研究了不同的受精液和不同的受精时间以及用不同的水质所配的胚胎培养液对夏季乏情季节晋中绵羊卵母细胞体外受精与胚胎发育的影响,以此优化夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外受精的方案。研究表明:受精液选用BO液和TCM-199成熟培养液的混合液（3:2,简称BM）时,晋中绵羊体外受精后的囊胚率有了显著的提高,达到31.96%。精卵共育成熟15～18h比10h和24h更适合于晋中绵羊体外受精胚胎的发育,可获得较理想的囊胚率（24.76% vs 29.59% vs 3.70% vs 10.89%）。Milli-Q超纯水配制的成熟培养液对绵羊卵母细胞成熟和胚胎早期发育的卵裂阶段无显著的影响,但就胚胎后期发育的囊胚率而言,效果明显优于三蒸水配制的成熟培养液（30.48% vs 19.75%）。

论文目录

• 中文摘要
• 文献综述
• 1 哺乳动物卵母细胞体外成熟的现状
• 2 哺乳动物体外受精的研究进展
• 实验一 绵羊卵母细胞体外成熟的优化研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂及仪器设备
• 1.2 试验材料
• 1.3 试验方法
• 1.4 统计分析
• 2 结果
• 2.1 成熟液中添加不同浓度FSH和LH对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 2.2 不同成熟时间对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 2.3 不同的卵巢运输温度对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 2.4 不同培养方法对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 2.5 成熟液中添加不同浓度雌激素对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 3 讨论
• 3.1 成熟培养液中添加不同浓度的FSH、LH对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 3.2 不同成熟时间对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 3.3 卵巢的不同运输温度对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 3.4 不同培养方法对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 3.5 在成熟液中添加不同浓度的雌激素对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外成熟的影响
• 4 结论
• 实验二 绵羊卵母细胞体外受精的优化研究
• 1 材料与方法
• 1.1 试剂及仪器设备
• 1.2 试验材料
• 1.3 试验方法
• 1.4 统计分析
• 2 结果
• 2.1 不同的受精液对夏季乏情季节绵羊体外受精胚胎发育的影响
• 2.2 精卵共育时间对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外受精的影响
• 2.3 用不同水质所配的培养液对夏季乏情季节绵羊卵母细胞体外受精与胚胎发育的影响
• 3 讨论
• 3.1 不同的受精液对夏季乏情季节绵羊体外受精与胚胎发育的影响
• 3.2 不同受精时章对夏季乏情季节绵羊体外受精与胚胎发育的影响
• 3.3 用不同的水质所配的成熟培养液对夏季乏情季节绵羊体外受精与胚胎发育的影响
• 4 结论
• 参考文献
• 英文摘要
• 附图
• 致谢