论文摘要
【背景与目的】脆性组氨酸三联体（fragile histidine triad，FHIT）基因是1996年Ohta等人在研究某家族性肾细胞癌时利用外显子捕获的方法发现的，并克隆了相应的cDNA。因包含有主要的脆性位点FRA3B及从属于组氨酸三联体（histidine triad，HIT）蛋白超家族，故命名。越来越多的研究发现，FHIT基因在大量的原发性肿瘤及细胞株中存在异常，尤其是在和环境中致癌因素关系密切的恶性肿瘤中其异常率较高。该基因被认为是一个候选的抑癌基因。胃癌是和环境致癌物密切相关的肿瘤，是消化道最常见的恶性肿瘤之一，已明确的胃癌的发病机制中，抑癌基因的失活或异常表达占据重要一席。因而研究胃癌中FHIT基因的异常对胃癌的发生发展及诊断治疗具有重要的理论和临床意义。化疗是胃癌除手术外非常重要的辅助治疗手段。但胃癌细胞对单用一种化疗药物的敏感性较差，且易出现耐药现象。同时，化疗作为临床上应用较多的抗肿瘤治疗方法，在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也有较大的损伤，这在一定程度上限制了其疗效。因此，寻找新型有效的治疗方法并配合传统的治疗手段以提高疗效具有重要的临床意义。随着对癌变机制的深入了解，肿瘤的抑癌基因疗法研究逐渐深入，已有望成为肿瘤治疗的有效辅助手段。有学者将FHIT基因导入肿瘤细胞并有效表达，可以使肿瘤细胞的一些恶性表型得以逆转，还可能诱导肿瘤细胞发生凋亡，从而达到治疗肿瘤或增强传统治疗方法的目的。还有学者将FHIT基因导入肺癌细胞株并有效表达，研究其对一些化疗药物敏感性的影响。但关于FHIT基因对胃癌细胞株化疗敏感性影响的研究，国内尚无报道。本研究将FHIT基因导入该基因表达缺失的人胃癌细胞株MGC-803，探讨FHIT基因对胃癌细胞凋亡、细胞周期及阿霉素（ADM）敏感性的影响。【方法】用脂质体将包含有外源性FHIT基因的重组真核表达质粒pRcCMV-FHIT及作为对照的空真核表达质粒pRcCMV转入FHIT蛋白表达缺失的人胃癌细胞株MGC-803中，G418筛选42天后，用Western Blot的方法验证了外源性FHIT蛋白的稳定表达。设未转染的亲本胃癌细胞为空白对照组，以阿霉素作用于三组细胞，倒置显微镜下观察细胞形态变化，用MTT法测定细胞的生长抑制率，用流式细胞仪检测阿霉素处理前后各组胃癌细胞凋亡及细胞周期的变化。【结果】1．获得了FHIT基因稳定表达的胃癌MGC-803细胞。2．胃癌细胞的生长抑制率存在阿霉素浓度依赖性和时间依赖性。3．外源性FHIT基因转染组的胃癌细胞的凋亡率（19.59％）明显高于空质粒转染组和未转染组细胞（4.41％，3.38％）。另外，细胞周期也出现了明显的改变，G0／G1期的细胞百分比也从空载体组56.30％的增加到FHIT基因转染组的74.43％。4．经阿霉素处理后，转染FHIT基因的MGC-803细胞的凋亡水平（40.66％）与空质粒转染组（13.94％）及胃癌细胞株组（15.81％）相比明显增高，存在显著性差异（P＜0.01），并且FHIT基因与阿霉素有轻度的协同促进凋亡作用（P＜0.05）；实验组胃癌细胞的生长周期较对照组出现了明显的G0／G1期阻滞（99.27％vs95.10％）。【结论】1．FHIT基因能诱导胃癌细胞MGC-803凋亡，并能诱导转染细胞发生G0／G1期细胞周期阻滞。2．FHIT基因表达与阿霉素协同促进MGC-803细胞凋亡及细胞周期阻滞，FHIT基因可增加胃癌细胞对阿霉素的敏感性。