凋亡诱导因子与未成熟脑缺氧缺血性损伤的关系

论文摘要

目的新生儿缺氧缺血（HI）性脑损伤是导致新生儿死亡以及儿童伤残的重要原因之一，发病机理复杂涉及多个方面，其中包括自由基损伤、半胱天冬酶（caspase）激活以及凋亡诱导因子（AIF）的释放和核转移等。本实验探讨AIF下调以及联合应用自由基清除剂伊达拉奉（3-甲基-1苯基-2-吡唑啉-5-酮）对未成熟脑缺氧缺血性损伤的影响。对象（1）观察HI对雄性野生型（Wt）小鼠与Hq小鼠脑损伤情况：9日龄雄性Wt小鼠（n=33），同日龄雄性Hq小鼠（n=37），HI 72h后进行脑损伤程度评估。（2）观察伊达拉奉对Wt小鼠与Hq小鼠脑损伤保护情况：9日龄Wt小鼠中对照组（n=16）及伊达拉奉治疗组（n=17），9日龄Hq小鼠中对照组（n=17）及伊达拉奉治疗组（n=16），HI后72h后进行脑损伤程度的评估。（3）观察钙蛋白酶与半胱天冬酶-3活性：同日龄的Wt小鼠与Hq小鼠，HI 24h后的Wt小鼠与Hq小鼠各6只，进行脑组织匀浆，进行免疫印迹和半胱天冬酶活性测定。（4）Wt小鼠对照组和伊达拉奉治疗组各6只，Hq小鼠对照组和伊达拉奉治疗组各6只，HI后3h，24h灌注取脑，进行免疫组化染色。方法1、新生小鼠HI脑损伤动物模型制备：生后9天新生小鼠结扎左侧颈总动脉并吸入浓度10.0％的氧气45min。2、给药方法和药物剂量：在动脉结扎后与缺氧后分别即刻经腹腔注射伊达拉奉注射液（10mg／kg）或相同体积的生理盐水作对照。3、脑组织病理学检查：HI后3h，24h，72h，灌注后取出脑组织，固定后常规脱水、包埋，连续切片，进行微管相关蛋白2（microtubule-associated protein 2，MAP2）、硝基酪氨酸（Nitrotysine）、4-羟壬烯醛（4-HNE）的表达检测。4．HI后半胱天冬酶-3与胞衬蛋白测定：HI 24h后的Wt小鼠与Hq小鼠对照组、治疗组各6只，分别取双侧大脑半球匀浆，荧光分光光度法测定半胱天冬酶-3活性；免疫印迹法测定胞衬蛋白含量，观察钙蛋白酶与半胱天冬酶-3活性。5、伊达拉奉治疗后半胱天冬酶-3，硝基酪氨酸测定：Wt小鼠对照组与治疗组各5只，Hq小鼠对照组与治疗组各7只，HI 24h后断头处死小鼠，大脑分左右半球进行超声匀浆，用荧光分光光度法测定半胱天冬酶-3活性、蛋白印迹测定硝基酪氨酸含量。6、统计学处理：数值采用均数±标准差（（?）±s）表示，采用Students t-test方法检验，用StatView 5.0软件处理。P＜0.05认为有统计学意义。结果1．大脑皮层、海马、纹状体和丘脑在HI后均可见梗塞灶。Hq小鼠脑损伤情况较Wt小鼠减轻。2．雄性Hq小鼠脑梗塞体积（6.55±0.99mm3）比雄性Wt小鼠脑梗塞体积（13.82±1.86mm3）减少了52.6％。3．Hq小鼠与Wt小鼠在HI后脑组织胞衬蛋白免疫印迹显示半胱天冬酶-3、钙依赖蛋白酶的激活无明显差别。4．Hq小鼠HI后3h硝基酪氨酸阳性细胞数明显高于Wt小鼠（P＜0.05）。5．伊达拉奉治疗可明显减少Hq小鼠硝基酪氨酸与脂质过氧化物的形成。6．伊达拉奉对半胱天冬酶活性无明显影响。结论低水平的AIF表达对未成熟脑缺氧缺血性脑损伤有神经保护作用；伊达拉奉可以增强这种保护作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分 凋亡诱导因子与未成熟脑缺氧缺血性损伤的关系
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述部分 伊达拉奉对幼年脑缺血缺氧损伤的神经保护机制研究进展
• 参考文献
• 英文缩略词
• 研究生学习期间完成的论文
• 致谢