食用菌不同层次遗传差异分子标记度量值的初步研究

论文摘要

采用AFLP和SRAP等两种分子标记研究了4个香菇菌株和4个侧耳属菌株(其中2个属于平菇,1个属于白灵菇,另1个属于榆黄蘑)的遗传差异。结果表明,就AFLP标记而言,四个香菇菌株间、两个平菇菌株间、三个侧耳属不同种之间以及香菇属与侧耳属间的遗传相似系数分别为0.74～0.89、0.89、0.47～0.89和0.44,而SRAP标记所揭示的香菇菌株间、平菇菌株间、侧耳属三个不同种之间以及香菇属与侧耳属间的遗传相似系数分别为0.70～0.93、0.93、0.47～0.93和0.53。据此可以初步认为,同一种食用菌不同菌株间的遗传相似系数约在0.70以上,侧耳属平菇、白灵菇、榆黄蘑等三个种的遗传相似系数约在0.5～0.7之间,而香菇属与侧耳属两属间的遗传相似系数一般不高于0.5。两种分子标记分析的结果还表明两个平菇菌株的全同胞个体和半同胞个体表现出“物以类聚”,即全同胞个体和半同胞个体分别优先聚为一类的趋向,而且半同胞菌株的遗传相似系数要小于全同胞菌株。同时,半同胞菌株的体细胞不亲和反应的强度要大于全同胞菌株,与分子标记分析的结果相吻合。两个香菇菌株的全同胞和半同胞菌株的聚类分析结果表明,在采用SRAP标记时,供试菌株表现出比较明显的全同胞和半同胞各自优先聚为一类的趋向,相比之下,在采用AFLP标记时,聚类的这种趋向性要弱一些,不过,在将两种标记的分析结果综合加以考虑时,分属两个类群的菌株大多仍能清楚地区分开来。综上所述,应用这两种分子标记鉴别香菇和侧耳属菌株是可行的,而且随着菌株间遗传距离增大,其遗传相似系数相应降低。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 香菇和侧耳的分类地位、形态特征及营养价值
• 1.2 糙皮侧耳和香菇的交配系统及生活史
• 1.3 四极性菌交配型的测定
• 1.4 体细胞不亲和性
• 1.5 原生质体技术在蕈菌中的应用
• 1.5.1 原生质体的分离、再生和融合
• 1.5.2 原生质体技术在蕈菌研究中的应用
• 1.6 分子标记技术
• 1.6.1 AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism,扩增片段长度多态性）
• 1.6.2 SRAP（Sequence Related Amplified Polymorphism,相关序列扩增多态性）
• 1.7.研究意义
• 2 材料与方法
• 2.1.试验材料
• 2.1.1 供试菌株
• 2.1.2 供试培养基
• 2.1.3 供试试剂
• 2.1.3.1 溶壁酶溶液
• 2.1.3.2 DNA提取系列试剂
• 2.1.3.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂配制
• 2.1.3.4 PCR反应系列试剂
• 2.1.4 仪器与设备
• 2.2.试验方法
• 2.2.1 组织分离
• 2.2.2 孢子单核体的获得
• 2.2.2.1 孢子印的获得
• 2.2.2.2 单孢分离
• 2.2.2.3 插片显微观察
• 2.2.3 菌丝原生质体单核体的获得
• 2.2.3.1 原生质体制备
• 2.2.3.2 原生质体单核体交配型的检测
• 2.2.4 担孢子交配型的鉴定
• 2.2.5 全同胞和半同胞双核体的配制
• 2.2.5.1 全同胞双核菌株的配制
• 2.2.5.2 半同胞双核菌株的配制
• 2.2.6 体细胞不亲和反应
• 2.2.7 基因组DNA的提取
• 2.2.7.1 DNA抽提
• 2.2.7.2 DNA的检测
• 6）'>2.2.8 SRAP体系优化（3⁶）
• 2.2.9 SRAP和AFLP所用体系及反应程序
• 2.2.9.1 SRAP标记所用体系及反应程序
• 2.2.9.2 AFLP标记接头的制备
• 2.2.9.3 AFLP标记所用体系及反应程序
• 3 结果与分析
• 3.1.单孢菌株镜检结果
• 3.1.1 Ph和P802的单孢菌株镜检结果
• 3.1.2 L26和L109的单孢菌株镜检结果
• 3.2 交配型检测
• 3.2.1 交配型检测结果
• 3.2.2 单孢配对及镜检情况
• 3.3 体细胞不亲和反应
• 3.3.1 Ph半同胞全同胞拮抗反应结果
• 3.3.1.1 Ph半同胞拮抗反应观察结果
• 3.3.1.2 Ph全同胞拮抗反应观察结果
• 3.3.2 P802半同胞全同胞拮抗反应结果
• 3.3.2.1 P802半同胞拮抗反应观察结果
• 3.3.2.2 P802全同胞拮抗反应观察结果
• 3.3.3 L109半同胞全同胞拮抗反应结果
• 3.3.3.1 L109半同胞拮抗反应观察结果
• 3.3.3.2 L109全同胞拮抗反应观察结果
• 3.3.4 L26半同胞全同胞拮抗反应结果
• 3.3.4.1 L26半同胞拮抗反应观察结果
• 3.3.4.2 L26全同胞拮抗反应观察结果
• 3.4.SRAP体系优化结果
• 3.5 电泳结果及聚类分析
• 3.5.1 香菇与侧耳属菌株电泳结果及聚类分析
• 3.5.2 糙皮侧耳亲本及全同胞半同胞菌株电泳结果及聚类分析
• 3.5.2.1 糙皮侧耳亲本及全同胞半同胞菌株AFLP电泳结果及聚类分析
• 3.5.2.2 糙皮侧耳亲本及全同胞半同胞菌株SRAP电泳结果及聚类分析
• 3.5.3 香菇亲本及全同胞半同胞菌株电泳结果及聚类分析
• 3.5.3.1 香菇亲本及全同胞半同胞菌株SRAP电泳结果及聚类分析
• 3.5.3.2 香菇亲本及全同胞半同胞菌株AFLP电泳结果及聚类分析
• 4 讨论
• 参考文献
• 致谢
• 附录