42份菊科花卉的离体保存及其遗传多样性的RAPD分析

论文摘要

本研究收集了42份菊科花卉种质资源。以菊科花卉带腋芽的茎段为外植体,建立菊科花卉的再生体系;以‘追鱼’菊花试管苗为材料,探讨试管苗限制生长保存方法并采用RAPD技术进行遗传稳定性的检测,以期为菊科花卉的离体繁殖和离体种质保存提供科学依据;对收集的42份菊科花卉进行试管保存,并利用RAPD技术进行了的遗传多样性分析。主要研究结果如下:1.菊科花卉再生体系的建立。以‘追鱼’菊花的茎段和‘追鱼’菊花试管苗为材料,分别研究其消毒、增殖、生根、移栽的最佳条件。试验结果表明:最佳消毒方法为75%酒精（30s）+0.1%的HgCl2（3 min）+无菌水+0.1%的HgCl2（3 min）;最佳增殖培养基为MS+0.3㎎/L 6-BA+0.15㎎/LNAA,增殖系数达到9.05;最佳生根培养基为1/2MS +0.2㎎/L NAA;最佳移栽基质为蛭石:泥炭土（1:2）的混合基质。2.菊科花卉试管苗离体保存方法的探讨。以‘追鱼’菊花试管苗生长3个月后的茎切段为材料,比较了不同浓度的蔗糖、琼脂、山梨醇和蔗糖、生长抑制物质、光照强度和光质等因素对试管苗限制生长保存的影响。结果表明:在MS培养基中添加40g/L蔗糖与15g/L山梨醇的处理保存效果最好,保存10个月时,存活率为77.8%,适宜的继代周期是8个月;光照强度对‘追鱼’菊花的离体保存影响不显著;添加30mg/LABA也有利于试管苗的离体保存。3.菊科花卉试管苗限制生长保存前后遗传稳定性的分析以限制生长法保存了15个月与保存前的菊花试管苗为材料,采用RAPD-PCR标记技术对菊花试管苗保存前后的遗传变异进行了检测。结果表明:保存前后的菊花RAPD图谱基本一致,说明保存后没有发生DNA水平的变异,遗传稳定性好,同时也说明这种限制生长保存方法可以适用于菊花的短期离体保存。4.42份菊科花卉种质资源的试管苗限制生长保存采用优化的保存方法对所收集的菊科花卉种质资源进行试管苗限制生长保存。每隔7个月继代1次,菊属,蟛蜞菊属的试管苗保存效果良好,保存后进行移栽,生长正常。其中万寿菊属的试管苗在保存过程中易出现玻璃化现象。5.42份菊科花卉种质资源遗传多样性的RAPD分析采用RAPD技术对42份菊科花卉种质资源进行了遗传多样性分析。结果表明:11个随机引物共产生127条扩增带,其中,扩增出的多态性谱带126条,多态性比率达99.2%,这表明42份菊科花卉的遗传多态性高,遗传资源的丰富。根据扩增条带多态性,构建了菊科花卉的亲缘关系树状图,当相似系数为0.362时,42份菊科花卉资源可分为4组,百日草、天人菊、金鸡菊的品种各为一组,菊花、万寿菊、蟛蜞菊的品种为一组;当相似系数为0.628时,分为10组,所有菊花品种为1组,其他品种分为9组;当相似系数为0.794时,共划分22组,33份菊花品种可以划分成13组,代表保存菊花的13个菊花种质群。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1 植物种资质源保存研究进展
• 1.1 植物种质资源保存方法的研究
• 1.2 植物种质资源离体保存的研究
• 2 植物遗传多样性的DNA 分子标记分析
• 2.1 RAPD 标记技术及应用
• 2.2 ISSR 标记技术及应用
• 2.3 AFLP 标记技术及应用
• 3 菊花生物技术研究进展
• 3.1 菊花再生体系的建立及离体保存研究进展
• 3.2 菊花遗传多样性DNA 分子标记分析
• 4 本研究的主要内容和意义
• 4.1 本研究的主要内容
• 4.2 研究意义
• 第二章 菊科花卉试管苗离体繁殖体系的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 培养条件
• 1.4 试管苗的移栽
• 2 结果与分析
• 2.1 ‘追鱼’菊花茎段消毒方式的确立
• 2.2 不同激素组合对‘追鱼’菊花试管苗增殖的影响
• 2.3 不同激素浓度对‘追鱼’菊花试管苗生根的影响
• 2.4 不同基质对‘追鱼’菊花试管苗出瓶移栽成活率的影响
• 3 讨论
• 3.1 影响外植体消毒效果的主要因素
• 3.2 NAA 有利于菊花试管苗的生根
• 第三章 ‘追鱼’菊花试管苗离体种质保存方法的探讨
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 限制生长法保存后材料的恢复再生
• 2 结果和分析
• 2.1 不同浓度蔗糖处理对菊花离体保存的影响
• 2.2 不同浓度琼脂处理对菊花离体保存的影响
• 2.3 不同浓度配比蔗糖与山梨醇处理下对菊花离体保存的影响
• 2.4 生长抑制物质对菊花离体保存的影响
• 2.5 光照对‘追鱼’菊花离体保存的影响
• 2.6 限制生长法保存后材料的恢复再生
• 3 讨论
• 3.1 培养基中添加蔗糖与山梨醇的保存效果最好
• 3.2 光照强度对‘追鱼’菊花的离体保存影响不显著
• 第四章 菊科花卉的离体保存
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同品种无菌系建立的比较
• 2.2 不同品种离体保存之间的差异
• 3 讨论
• 第五章 菊科花卉离体保存前后遗传稳定性的检测
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 主要实验设备、实验试剂及所需溶液的配制
• 1.3 RAPD 分析方法
• 2 结果与分析
• 2.1 菊科花卉基因组DNA 的提取质量
• 2.2 RAPD 引物筛选
• 2.3 离体限制生长保存前后的RAPD 检测
• 3 讨论
• 3.1 应用RAPD-PCR 技术检测试管苗保存前后的遗传稳定性
• 3.2 试管苗限制生长保存过程中的遗传变异
• 第六章 菊科花卉遗传多样性的 RAPD 分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 主要试验设备、试验试剂及所需溶液的配制
• 1.3 RAPD 分析方法
• 2 结果与分析
• 2.1 菊科花卉基因组DNA 的提取质量
• 2.2 RAPD 引物筛选
• 2.3 菊科花卉资源RAPD 多态性分析
• 2.4 RAPD 标记菊科花卉的聚类分析
• 3 讨论
• 3.1 关于菊花基因组DNA 提取的方法
• 3.2 关于RAPD 重复性、稳定性问题
• 3.3 菊花核心种质的构建
• 第七章 小结
• 参考文献
• 附录 图版及图版说明
• 致谢