论文摘要
目的:微卫星序列即重复单位长度在26bp的重复序列,又名短串联重复序列（short tandem repeats, STR）或简单重复序列（simple sequence repeats, SSRs）,统称STR,是目前法医DNA分析中最常用的一类遗传标记。STR基因座在人类基因组中分布广泛,个人识别能力和灵敏度高;STR基因座因等位基因片段长度多在400bp以下且易于扩增,尤其适用于陈旧、降解生物检材的DNA分析;STR基因座因等位基因片段长度差异较小、扩增条件类似,还可以进行复合扩增,简化操作程序以提高工作效率;STR分型检测的高灵敏性适用于微量、超微量检材的鉴定。目前常染色体和Y染色体STR基因座已广泛应用于法医学的个人识别和亲眷鉴定,但是在某些特殊的案件中,如父女关系的单亲的亲权鉴定、在父母缺失的姐妹认亲案中、由于X-STR遗传标记来自男性的母亲并将传递给女儿的独特遗传方式,在解决此类案件时有常染色体所无法比拟的优点。本文通过对DXS6800 /DXS6797/GATA172D05/DXS986等四个STR位点在河北汉族群体的等位基因及基因型的观察,获得其群体遗传多态性资料,为相关疾病的诊断、STR遗传学数据库的建立和法医学亲权鉴定应用提供基础资料。方法:无关个体样本基因组DNA的提取采用酚-氯仿法,家系和腐败降解检材基因组DNA的提取采用Chelex-100法。扩增反应体系为20μl,分别加入各个基因座特异性的引物,并设定不同的退伙温度,经28个循环后,可得到各个基因座长度不等的等位基因片段。然后取3μl PCR扩增产物与3μl含甲酰胺的载样缓冲液混合后在6%变性聚丙烯酰胺凝胶（尿素浓度为6mol/L）中电泳,恒定电压200V,电泳5小时。经硝酸银染色后,将各等位基因电泳谱带与等位基因标准品进行比对判型。等位基因标准品应用超滤离心法制备而成,测序后根据国际法医血液遗传学会DNA委员会推荐的命名原则进行命名。结果:4个基因座相关遗传学参数在河北汉族150名无关男性及150名无关女性个体中DXS6800基因座发现6个等位基因,DXS6797基因座发现6个等位基因,GATA172D05基因座发现6个等位基因,DXS986基因座发现7个等位基因。X2检验结果表明,在男女人群之间4个基因座的等位基因频率分布差异无显著性（P>0.05）,因此可以合并男女的数据进行总体基因频率的统计。DXS6800/DXS6797/GATA172D05/DXS986四个基因座女性个人识别率分别为0.9087,0.9777,0.9271,0.9627;非父排除率分别为0.7117,0.8773,0.7619,0.8399;合并数据后各基因座多态信息含量分别为0.8086,0.8279,0.8466,0.8507。以150名男性个体作为研究对象,调查了4个X染色体STR基因座所组成的单倍型频率,结果发现了138种单倍型,单倍型多样性达0.9986,以男性单倍型频率来估计个体识别率和女性非父排除率,分别达到了0.9986和0.9993。4个基因座的遗传稳定性对4个已经确定父女关系的家系样本研究表明,父亲的X染色体能够稳定的遗传给女儿,符合孟德尔遗传定律。4个基因座的同一性对来自同一尸体不同组织的降解检材的检测表明,4个基因座在同一个体中具有同一性,符合STR基因座用做法医DNA分析的标准。结论:本研究首次提供了河北汉族人群DXS6800/DXS- 6797/GATA172D05/DXS986基因座分布的多态性数据,为在河北汉族人群中开展以DXS6800/DXS6797/GATA172D05/ DXS986基因座为基础的个人识别和亲子鉴定工作提供了基础数据资料。