（遵义市第一人民医院肾脏内科贵州遵义563000）
【摘要】目的：对腹部切口构建急性肾缺血再灌注损伤动物模型予以优化，构建急性肾缺血再灌注损伤模型的新途径。方法：大鼠取俯卧位予以固定，将腹部垫起，在背部正中偏右一厘米处切开皮肤，开口为三厘米，切开腰背筋膜肾周脂肪组织暴漏在外，因此已进入腹膜后间隙。通过拉钩支撑切口，通过钝性游离脂肪组织右肾与肾蒂漏出，在此基础上分离右肾动脉直到腹主动脉，通过棉签向腹主动脉底端游离，方可发现左肾动脉。隔绝举措：无损伤动脉夹隔绝双肾动脉，滞留四十五min，松开无损伤动脉夹，查看肾灌注无异常后缝合切口。结果：实验组一只Sprague-Dawley由于术中出血而死亡，其他十五只术后存活，实验组的手术成功率超过九十三个百分点，伪手术组及对照组Sprague-Dawley术后均存活。实验组serumcreatinine与BUN显著超过伪手术组及对照组，检测结果表明实验组Sprague-Dawley第一天、第四天与第七天的serumcreatinine与BUN逐渐降低，且P＜0.05，即术后肾功能慢慢得到恢复。结论：此次研究我们所构建的大鼠急性肾缺血再灌注模型具有较强的稳定性，可以很好的匹配于急性肾缺血再灌注损伤研究。
【关键词】大鼠；急性肾缺血；再灌注损伤模型；构建；分析
【中图分类号】R3【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）25-0349-02
分析细胞及其因子在急性肾损伤中的功能，同时分析药物对急性肾损伤的治疗过程所需构建急性肾缺血再灌注损伤动物模型。目前的建模模式包括腹部切口与侧腹部切口。腹部切口对胃肠道功能具有一定的影响，同时也可能造成腹腔感染；侧腹部切口要破坏侧腹部肌群，同时肾蒂的暴漏不完全。此次研究通过背部切口，切开腰背筋膜进入腹膜后间隙，隔绝双侧肾动脉，成功构建大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型。此举措相对便捷，其特点为手术创伤小、不会对胃肠道造成较大的影响同时不易出现并发症。文章将以大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型的构建及分析作为切入点，在此基础上予以深入的探究，相关内容如下所述。
1.材料及方法
1.1材料
随机选择三十二只Sprague-Dawley，平均体重为二百二十克，通过一般饲料喂养。
试剂与设备包括：6.94%（±0.47）CCI3CH（OH）2；3.8%（±0.5）POM；无损伤动脉夹；显微手术设备；serumcreatinine；BUN检测试剂盒；MDA检测试剂盒；Eclipse50i显微镜；ultrospec4300pro分光光度计。
1.2方法
大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型的构建。麻醉方式：6.94%（±0.47）CCI3CH（OH）2，0.3克/千克，通过腹腔注射。游离肾动脉：大鼠取俯卧位予以固定，将腹部垫起，在背部正中偏右一厘米处切开皮肤，开口为三厘米，切开腰背筋膜肾周脂肪组织暴漏在外，因此已进入腹膜后间隙。通过拉钩支撑切口，通过钝性游离脂肪组织右肾与肾蒂漏出，在此基础上分离右肾动脉直到腹主动脉，通过棉签向腹主动脉底端游离，方可发现左肾动脉。隔绝举措：无损伤动脉夹隔绝双肾动脉，滞留四十五min，松开无损伤动脉夹，查看肾灌注无异常后缝合切口。
此次研究我们将三十二只Sprague-Dawley随机分成三组，即实验组十六只、伪手术组八只以及对照组八只。实验组通过上述举措构建大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型；伪手术游离左、右侧肾动脉后不予以夹闭处理，其余步骤与实验组相同；对照组Sprague-Dawley的饲养方式等无差异，仅用于对比。
1.3观察标准
术后第一天、第四天、第七天予以采血，检测serumcreatinine与BUN水平评估肾功能，而在术后第一天及第七天三组各随机选择三只处死，并采集肾组织，制备9.5%（±0.64）肾组织匀浆检测丙二醛饱和度；选择部分肾组织通过3.8%（±0.4）POM予以固定，经C25H32包埋后制成四微米切片，在此基础上予以苏木精-伊红染色法染色，同时行肾小管坏死半定量分析。
1.4统计学方法
此次研究统计择取SPSS16.0软件，多组样本均数对比择取ANOVA方差予以分析，P≤0.05即对比有显著的统计学差异。
2.结果
实验组一只Sprague-Dawley由于术中出血而死亡，其他十五只术后存活，实验组的手术成功率超过九十三个百分点，伪手术组及对照组Sprague-Dawley术后均存活。实验组serumcreatinine与BUN显著超过伪手术组及对照组，检测结果表明实验组Sprague-Dawley第一天、第四天与第七天的serumcreatinine与BUN逐渐降低，且P＜0.05，即术后肾功能慢慢得到恢复。
众所周知肾脏丙二醛水平在很大程度上体现了机体中脂质过氧化的水平，能够间接一线组织细胞受损状态。实验组术后第一天Sprague-Dawley肾丙二醛显著超过对照组，且P＜0.05，所以此建模模式能够造成大鼠肾损伤。实验组术后的第七天丙二醛值呈降低之势，不过依然超过对照组。
在行术后的第一天，我们对三组Sprague-Dawley分别取肾，肉眼见实验组的肾包膜紧张，有显著的肾肿胀现象，切片后予以苏木精—伊红染色法。术后第一天在光镜下发现，肾小管上皮细胞出现肿胀，个别区域发生坏死以及溶解现象，肾间质出血同时伴有明显的炎细胞浸润，伪手术组的肾组织无显著改变；通过透射电镜检查表明实验组Sprague-Dawley肾组织发生一系列的损伤性变化，肾小管出现坏死的情况，线粒体肿胀、同时溶酶体呈几何形递增。在术后第七天，可见实验组肾形态无显著改变，苏木精—伊红染色法见肾小管上皮肿胀有所缓解，发生灶性坏死，电镜检查表明依然存在损伤性变化，肾小管上皮细胞存在异常正常，伪手术组的肾组织无显著变化。
3.讨论
此次研究通过背侧切口逐层切开皮肤与腰背筋膜，在此基础上深入腹膜后间隙，游离双侧肾动脉并钳夹，构建大鼠急性肾缺血再灌注损伤模型。
背侧入路能够依附于单侧肾钳夹与对侧肾切除的操作去构建急性肾缺血再灌注损伤模型。背侧切口能够暴漏同侧的肾动脉，在此次研究过程中我们发现，经左侧切口显露右肾动脉相对困难，而右侧背部切口则可以很好的显露双侧肾动脉。我们还可将背部皮肤予以游离，在左侧背部皮下进行切口，进而辅助一侧肾钳夹与对侧肾切除。肾静脉管壁薄同时和肾动脉贴服在一起，在钝性分离肾动脉的过程中动作需缓慢精细。
综上所述，通过背侧切口的建模举措具有一定的可靠性，且成功率高，不用通过特殊训练就能够熟练掌握，同时利于Sprague-Dawley术后第一时间恢复。此次研究我们所构建的大鼠急性肾缺血再灌注模型具有较强的稳定性，可以很好的匹配于急性肾缺血再灌注损伤研究。
【参考文献】
[1]艾娜，谢席胜，樊均明，龙琼先，王宝福，王彦江.大鼠肾缺血再灌注损伤模型改良手术方式结果与评价[J].中国中西医结合肾病杂志，2013年02期.
[2]李苏童，王汉民，李嫚，刘广厚，何丽洁，陈光磊，张鹏.缺血后处理对缺血再灌注损伤大鼠肾脏HIF-1α的影响[J].中国血液净化，2014年05期.
[3]余晓东，廖波，邓显忠，姜果，朱平宇，鲁栋梁，唐铁龙，杨雪松，陈双全，程树林.一种新型实用的大鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立[J].重庆医学，2012年13期.
[4]陈宗平.HIF-1α基因在大鼠缺血—再灌注肾组织中表达的意义以及高压氧、丹参酮ⅡA对其表达影响的实验研究[D].遵义医学院，2015年.