论文摘要
流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）简称乙脑病毒，又称日本脑炎病毒，是一种严重危害人畜（尤其是儿童）健康的虫媒病毒。目前没有治疗乙脑的有效药物。接种乙脑疫苗是控制乙脑的最重要措施。我国是乙型脑炎发病人数最多的国家。但近十几年来，乙脑的发病率明显下降，其中原因主要归功于疫苗的接种。目前国际普遍接种的疫苗是鼠脑来源的灭活疫苗。如日本、韩国、新加坡、印度以及美国等使用鼠脑来源的Nakayama株和／或Beijing-1株的灭活疫苗。由于灭活疫苗存在一些缺点，即（1）需要多次接种才能产生良好的免疫效果，（2）不良反应渐多，如局部反应率达20％左右，全身反应率达10％，（3）价格昂贵，生产工艺复杂等大大影响其进一步推广。因此需要研究生产更有效、安全、方便的疫苗。目前研究的新疫苗有两类，第一为减毒活疫苗，由SA14衍生出的SA14-14-2已经被多方面证明毒力低、安全性好。目前我国广泛使用的疫苗有SA14-14-2株原代地鼠肾细胞减毒活疫苗和北京P3株地鼠肾细胞灭活疫苗。SA14-14-2株原代地鼠肾细胞减毒活疫苗在国内已经成功接种逾2亿人，经证实安全、有效、便宜。第二类为基因重组疫苗。IC47为无毒重组的JEV，但由于没有解决稳定剂型、清除毒力逆转的问题，在作为正规疫苗应用之前，有很长的一段距离。因此，减毒活疫苗SA14-14-2病毒株引起国内国际疫苗界人士的高度重视。 本课题选用JEV SA14-14-2第一个被翻译的非结构基因ns1进行研究，采用PCR方法扩增NS1蛋白基因和E蛋白基因片段，将各基因片断克隆到原核表达载体pET系统上，并使其在大肠杆菌中诱导表达，筛选出表达菌株pET-32Et和pET—30NS1，通过亲和层析对两种蛋白进行纯化，得到纯度在96％以上的目的蛋白。