重组人粒细胞集落刺激因子对HL-60细胞的作用及其对阿糖胞苷毒性作用影响的研究

论文摘要

目的 研究人重组粒细胞集落刺激因子（rhuG-CSF）对人类早幼粒细胞性白血病细胞株（HL-60）的作用,及其对阿糖胞苷（Ara-c）对HL-60细胞的毒性作用的影响。 方法 一:取对数生长期的HL-60细胞为实验对象,设空白对照组和实验组,实验组加入不同浓度的rhuG-CSF,培养48小时分别进行瑞氏染色形态学观察、吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双染色观察细胞凋亡、MTT实验观察细胞增殖活性、NBT实验、CD13测定检测细胞分化成熟。二:另取HL-60细胞分别加入Ara-c、Ara-C+rhuG-CSF、rhuG-CSF,分别进行瑞氏染色形态学观察、MTT实验、AO/EB双染色,观察HL-60细胞的凋亡和增殖的变化。 结果 一:与rhuG-CSF培养48小时后,实验组HL-60细胞出现不同程度的变形、体积变小、出泡,小泡和细胞仍保持膜的完整性。瑞氏染色可见细胞核浓缩,紫兰色的核染色质聚集成块,有的沿核膜分布呈边集现象,可见典型的凋亡小体。MTT实验中对照组OD值与各实验组相比差别均有统计学意义（P<0.05）,部分差别有显著性统计学意义（P<0.01）。各实验组间随着rhuG-CSF浓度的升高,OD值降低,两两比较差别亦有统计学意义（P<0.05）,部分差别有显著性统计学意义（P<0.01）。AO/EB双染色细胞凋亡率随rhuG-CSF浓度的升高,凋亡率上升,两两比较差别均有统计学意义（P<0.05）,部分差别有显著性统计学意义（P<0.01）。NBT实验的OD值各组间相比较差别没有统计学意义（P>0.05）。CD13阳性率各组间差别亦无统计学意义（P>0.05）。二:各实验组细胞形态变化显著,细胞变小,出泡明显。瑞氏染色细胞核浓缩、核染色质边集显现多见。MTT实验各组之间差别均有显著性统计学意义（P<0.01）。AO/EB双染色细胞凋亡率各组差别有显著性统计学意义（P<0.01）,其中HL-60+Ara-c+ rhuG-CSF组凋亡率最高。HL-60+Ara-c组与HL-60+Ara-c+ rhuG-CSF组凋亡率比较差别亦有显著性统计学意义（P<0.01）。 结论 1.rhuG-CSF有抑制HL-60细胞增殖并促进其凋亡的作用。 2.rhuG-CSF无诱导HL-60细胞分化成熟的作用。 3.rhuG-CSF可以促进Ara-c诱导HL-60细胞凋亡的作用。

论文目录

• 引言
• 第一章 实验材料与实验方法
• 1.1 实验材料、仪器和试剂
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要仪器设备
• 1.1.4 主要试剂的制备
• 1.2 实验方法和步骤
• 1.2.1 细胞培养方法
• 1.2.2 rhuG-CSF对HL-60细胞的作用
• 1.2.3 rhuG-CSF对阿糖胞苷（Ara-C）抗肿瘤作用的影响
• 1.2.4 实验结果判断
• 1.2.5 统计学处理
• 第二章 实验结果
• 2.1 rhuG-CSF对HL-60细胞的作用
• 2.2 rhuG-CSF对Ara-c毒性作用的影响
• 第三章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢
• 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明
• 综述