真姬菇与金针菇原生质体融合育种研究

论文摘要

本研究对6种食用菌在液体和栽培料培养时产漆酶能力和产酶规律进行了比较分析,实验结果表明：在液体培养条件下,凤尾菇、秀珍菇和鸡腿菇均在第6d左右达到酶活峰值,金针菇酶活持续增加,在第10d达到峰值。在栽培料培养条件下,凤尾菇、秀珍菇和鸡腿菇均在大试管中长至一半时达到酶活峰值,金针菇酶活持续增加,在原基形成时达到峰值。在两种培养条件下,生长速度较快的凤尾菇、秀珍菇、金针菇fl98、鸡腿菇漆酶活性均较高,而生长速度慢的白玉HM03和滑菇漆酶活性较低,漆酶产生规律相同,产漆酶能力较强的菌种菌丝生长较快,产酶高峰多出现较早,而产漆酶能力较弱的菌种菌丝生长较慢。据酶活测定结果,选择无漆酶活性的白玉HM03和漆酶活性较高的金针菇fl98作为实验材料,采用原生质体融合技术选育新菌种。原生质体制备试验结果表明：在2%溶壁酶条件下,以0.6mol/L甘露醇作为稳渗剂,酶解3h,白玉HM03原生质体产量达到5.1×106个/mL。在1.5%溶壁酶条件下,以0.6mol/L KCl作为稳渗剂,酶解2h,原生质体产量达到6.7×107个/mL。原生质体再生率分别为2.8%和4.7%。在融合剂25%PEG(4000、50mmol/LCaCl2·H2O、甘露醇0.6mol/L、pH8.0,稳渗剂0.6mol/L甘露醇的作用下,将热灭活的金针菇fl98原生质体与白玉HM03原生质体融合,采用RB-PDA平板显色技术筛选出融合菌株ⅡB、ⅡC、ⅢA和Ⅴ6。平板复筛和形态学鉴定结果表明：融合子Ⅱ C变色稳定,生长速度快,且与两亲本有明显的拮抗线。对融合子ⅡC进行遗传学分析和分子鉴定,11个RAPD引物共扩增出131条条带,融合子ⅡC与白玉HM03和金针fl98的相似指数分别为71%和40%。5种ISSR引物共扩增出61条条带,融合子ⅡC与白玉HM03和金针fl98的相似指数分别为57%和37.5%。说明融合子Ⅱ C为新的菌株,与白玉菇亲缘关系较近。出菇试验显示：相对于白玉HM03,融合子ⅡC菌柄较粗较长,菌盖颜色较白。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 英文缩略表
• 第零章 前言
• 1 真姬菇概述
• 1.1 真姬菇简介
• 1.2 真姬菇的营养价值
• 1.3 真姬菇的生物学特性
• 2 金针菇概述
• 2.1 金针菇简介
• 2.2 金针菇营养价值
• 2.3 生物学特性
• 3. 木质素降解酶系概述
• 3.1 漆酶
• 3.2 木素氧化酶和锰过氧化酶
• 3.3 漆酶酶活测定方法
• 3.4 木素氧化酶（Lip）及锰过氧化物酶（Mnp）酶活测定方法
• 4 食用菌育种技术
• 4.1 人工选择育种
• 4.2 单孢分离和组织分离
• 4.3 食用菌杂交育种
• 4.4 食用菌诱变育种
• 4.5 基因工程育种
• 4.6 原生质体融合育种
• 5. 本研究的目的及创新之处
• 第一章 不同食用菌漆酶产生规律研究
• 1 材料与方法
• 1.1 供试材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 不同菌种生长速度测定
• 2.2 不同菌种在液体培养基中漆酶产生规律
• 2.3 不同菌种在栽培料中漆酶产生规律
• 3 结论与讨论
• 第二章 真姬菇与金针菇原生质体融合
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2. 结果与分析
• 2.1 出发菌株平板上漆酶的测定结果
• 2.2 不同因素对原生质体制备的影响
• 2.3 原生质体再生结果
• 2.4 平板初筛结果
• 2.5 平板复筛结果
• 3. 结论与讨论
• 第三章 融合子的鉴定
• 1. 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2. 试验方法
• 2. 结果及分析
• 2.1 菌株生长速度比较结果
• 2.2 融合子与亲本酶活比较结果
• 2.3 拮抗实验结果
• 2.4 DNA提取结果
• 2.5 RAPD分析结果
• 2.6 ISSR分析结果
• 2.7 出菇实验结果
• 3 结论与讨论
• 参考文献
• 致谢