肝肿瘤细胞多药耐药机制及其逆转的研究

论文摘要

血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）是血红素代谢的限速酶,具有多种生物活性,如抗炎、抗氧化、抗凋亡、调节微循环等。现有大量的报道,在肿瘤耐药的细胞中发现有血红素加氧酶-1过表达的现象。同时,肿瘤的多药耐药性是现在肿瘤化疗失败的一个重要原因。因此,探讨血红素加氧酶-1高表达与肝肿瘤细胞多药耐药性之间的关系,对于深入认识肿瘤多药耐药的机制有重要的理论意义,并且对于提高肿瘤的化疗效果有重要的实际价值。目的:通过增加和降低血红素加氧酶-1的表达量,检测两种肝肿瘤耐药标志物P-170和GST-π的表达量及P-170的功能变化,确定血红素加氧酶-1是否是肝肿瘤多药耐药产生的原因之一。方法:首先分别用血红素加氧酶-1的诱导剂（Hemin）和抑制剂（Zinc（Ⅱ） protorphyrin IX）对肝癌耐药细胞株Bel/Fu作用24小时,然后用MTT法检测肝耐药细胞Bel/Fu对5-氟尿嘧啶,阿霉素,丝裂霉素三种化疗药物的存活率;再用RT-PCR的方法检测血红素加氧酶-1,P-GP, GST-π在mRNA水平的表达量;用Western Blotting的方法检测P-GP在蛋白质水平的表达量,并以Actin,beta作为内参;用免疫细胞化学的方法检测GST-π在Bel/Fu细胞中的表达量;用流式细胞术检测P-GP的外排药物的功能。结果:1.MTT结果:（1）经5-氟尿嘧啶作用24小时后,Hemin组细胞的存活率明显高于对照组（P<0.05）,znpp组细胞的存活率明显低于对照组（P<0.05）。（2）经阿霉素作用24小时后,Hemin组细胞的存活率明显高于对照组（P<0.05）,znpp组细胞的存活率明显低于对照组（P<0.05）。（3）经丝裂霉素作用24小时后,Hemin组细胞的存活率明显高于对照组（P<0.05）,znpp组细胞的存活率明显低于对照组（P<0.05）。2.RT-PCR结果:（1）随Hemin浓度的逐渐升高,血红素加氧酶-1基因的表达量逐渐增加;随Zinc（Ⅱ） protorphyrin IX浓度的逐渐升高,血红素加氧酶-1基因的表达量逐渐减少。（2）随Hemin浓度的逐渐升高,MDR-1基因的表达量逐渐增加;Zinc（Ⅱ） protorphyrin IX浓度的逐渐升高,MDR-1基因的表达量逐渐减少。（3）随Hemin浓度的逐渐升高, GST-π基因的表达量逐渐增加;Zinc（Ⅱ） protorphyrin IX浓度的逐渐升高,GST-π基因的表达量逐渐减少。3.Western blotting结果:随Hemin浓度的逐渐升高,P-GP的蛋白质表达量逐渐增加;随Zinc（Ⅱ） protorphyrin IX浓度的逐渐升高,P-GP的蛋白质表达量逐渐减少。4.免疫细胞化学结果:细胞爬片中Hemin组的细胞中GST-π蛋白的表达量明显高于对照组;而znpp组的细胞中GST-π蛋白的表达量明显的低于对照组。5.流式细胞术结果:随Hemin浓度的逐渐升高,P-GP的药物外排功能逐渐提高;Zinc（Ⅱ） protorphyrin IX浓度的逐渐升高,P-GP的药物外排功能逐渐下降。结论:1.验证了Hemin诱导血红素加氧酶-1在肝癌耐药细胞Bel/Fu的高表达,Zinc（Ⅱ） protorphyrin IX抑制血红素加氧酶-1在肝癌耐药细胞Bel/Fu的低表达。2.血红素加氧酶-1的表达量与肿瘤耐药标志物P-gp和GST-π的表达量呈正相关,且血红素加氧酶-1的表达量影响P-gp的药物外排功能。3.血红素加氧酶-1的高表达是肝细胞肿瘤产生多药耐药性的机制之一。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料与方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢