甜樱桃品种S基因型鉴定及遗传多样性分析

论文摘要

甜樱桃（Prunus avium L.）种植业是经济效益最好的果树产业之一,有“黄金种植业”之称。甜樱桃不仅果实鲜丽,而且含有较丰富的营养价值,值得广泛的种植。但其自交不亲和性和品种名称的混杂,限制了甜樱桃的正确评价和合理利用。研究选用3对蔷薇科李属通用引物组合对17个甜樱桃品种进行了S等位基因的PCR扩增,对其进行S基因型鉴定,并且利用SSR标记技术探讨品种间的遗传多样性及亲缘关系,旨在为生产果园授粉树的合理配置,对评价、利用品种资源及进行遗传育种研究提供理论依据。主要研究结果如下:1.三对引物组合对参试甜樱桃品种的扩增差异不是很大,比较而言引物组合EM-PC2consFD+EM-PC3consRD扩增效果最好,PruC2+PruC4R次之,PruC2+PruC5扩增效果一般。2.用引物组合EM-PC2consFD+EM-PC3consRD进行PCR扩增,克隆S基因特异PCR扩增片段并在GenBank上搜索。结果表明,在电泳中显示的相同大小的PCR片段,是同一种S基因。各S基因扩增片段大小分别是,S1大小为630bp,S2大小为2100bp,S3大小为716bp,S4大小为895bp,S6大小为456bp。3.通过综合3对引物组合的扩增结果,确定了17个品种S基因型。分别为‘大紫’（S1S6）、‘泰安大紫’（S1S6）、‘芝罘红’（S1S6）,‘岱红’（S1S3）、‘美早’（S1S3）、‘友谊4号’（S1S3）、‘意大利早红’（S1S3）、‘左滕锦’（S1S3）、‘加红’（S1S3）、‘乌克兰2号’（S1S3）、‘红灯’（S1S3）,‘雷尼’（S1 S4）、‘斯巴科’（S1S4）,‘红尼’（S3S6）,‘萨姆’（S3S4）、‘那翁’（S3S4）、‘鸡心’（S2S4）。4在20对SSR引物中,UDP98-409引物等9对引物多态性较高。聚类结果表明,29个品种分成5个大组,遗传多样性较为丰富。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 问题的提出
• 1.2 植物自交不亲和性的研究进展
• 1.2.1 植物自交不亲和性及其分类
• 1.2.2 配子体自交不亲和性的研究进展
• 1.2.2.1 梨自交不亲和性研究进展
• 1.2.2.2 杏自交不亲和性研究进展
• 1.2.2.3 扁桃自交不亲和性研究进展
• 1.2.3 果树品种确定S 基因型的方法
• 1.2.3.1 田间授粉鉴定法
• 1.2.3.2 花柱离体培养法
• 1.2.3.3 等电聚焦凝胶电泳确定S 基因型（isoelectric focusing: IEF）
• 1.2.3.4 PCR 扩增确定S 基因型（S-allele-speicific PCR）
• 1.2.4 几种李属果树 S 基因型鉴定
• 1.2.4.1 梨品种 S 基因型鉴定
• 1.2.4.2 扁桃品种S 基因型鉴定
• 1.2.4.3 杏品种S 基因型鉴定
• 1.2.5 甜樱桃自交亲和性研究进展及S 基因的鉴定
• 1.3 SSR 标记原理及其在果树上的应用
• 1.3.1 SSR 标记的原理
• 1.3.2 SSR 引物的开发途径
• 1.3.3 SSR 在果树上的应用
• 1.4 本研究的内容及目标
• 2 材料与方法
• 2.1 甜樱桃品种S 基因型鉴定
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.1.1 植物材料
• 2.1.1.2 菌株
• 2.1.2 试验方法
• 2.1.2.1 基因组DNA 提取
• 2.1.2.2 S-等位基因PCR 扩增
• 2.1.2.3 PCR 扩增产物的回收
• 2.1.2.4 特异片段的连接、转化和测序
• 2.1.2.4.1 连接反应
• 2.1.2.4.2 大肠杆菌感受态细胞的制备
• 2.1.2.4.3 大肠杆菌感受态细胞的转化及测序
• 2.2 甜樱桃品种遗传多样性的SSR 分析
• 2.2.1 试验材料
• 2.2.2 试验方法
• 2.2.2.1 SSR 引物序列
• 2.2.2.2 SSR-PCR 扩增
• 2.2.2.3 凝胶电泳及数据分析
• 3 结果与分析
• 3.1 甜樱桃品种S 基因型鉴定
• 3.1.1 不同引物组合对甜樱桃S 基因的扩增效果比较、分析及筛选
• 3.1.1.1 三对引物组合对甜樱桃S 基因的扩增效果比较
• 3.1.1.1.1 引物组合EM-PC2consFD+EM-PC3consRD 对甜樱桃S 基因的扩增效果
• 3.1.1.1.2 引物组合PruC2+PruC4R 对甜樱桃S 基因的扩增效果
• 3.1.1.1.3 引物组合PruC2+PruC5 对甜樱桃S 基因的扩增效果
• 3.1.1.2 不同引物组合对甜樱桃S 基因扩增电泳图比较
• 3.1.2 甜樱桃品种自交不亲和S 基因的鉴定
• 3.1.2.1 甜樱桃S 基因的克隆测序
• 3.1.2.2 甜樱桃品种S 基因型的鉴定
• 3.2 甜樱桃品种遗传多样性的SSR 分析
• 3.2.1 甜樱桃SSR 多态性引物筛选与SSR 多态性
• 3.2.2 聚类分析
• 4 讨论
• 4.1 关于李属果树S 基因特异PCR 引物的筛选
• 4.2 关于甜樱桃S 基因型的确定
• 4.3 关于甜樱桃SSR 的多态性引物
• 4.4 关于各甜樱桃品种间聚类关系
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表论文情况