论文摘要
虽然自体大隐静脉是最常用的动脉旁路术血管移植物,但是移植静脉的远期通畅率不甚理想。目前的一些干预方法,如药物、血管吻合口外支架等,已经能够起到一定的防治移植静脉血栓形成和内膜增生效果。内膜增生是移植静脉闭塞的主要病因之一,而动脉的血流动力学环境是移植静脉内膜增生的始发因素。在动脉环境中,移植静脉管壁的径向压力和轴向剪切力都比原静脉环境大幅增高。虽然轴向的剪切力能够抑制移植静脉的内膜增生,但是管壁压力的急剧升高对移植静脉内膜增生的促进作用更加明显。根据Laplace定律,静脉管壁承受的压力跟管壁的直径呈正相关。因此通过在移植静脉外使用血管外支架,则有助于防止移植静脉壁扩张导致的管壁径向压力过度升高促发的静脉内膜增生。目前研究认为能够抑制和拮抗移植静脉内膜增生的血管外支架应该满足以下几个要求:（ⅰ）血管外支架的降解速率应该能够调节;（ⅱ）能够为移植静脉提供足够的支撑强度;（ⅲ）不能影响组织活性和功能。在本研究中,我们制备了一种能够满足以上要求的新型生物可降解高分子材料Poly（EC-CL）,并通过静电纺织技术制作了用于包绕移植静脉含紫杉醇的Poly（EC-CL）血管外支架,最后我们通过动物实验评价了含紫杉醇的Poly（EC-CL）血管外支架抗移植静脉再狭窄的作用。第一部分可降解高分子共聚物Poly（EC-CL）的制备及性能测试目的:合成一种力学性能可调控的新型生物高分子材料Poly（EC-CL）。方法:通过稀土配合物Nd（DBMP）3催化碳酸亚乙酯和CL开环共聚合。1H NMR检测聚合物化学结构,XRD检测了共聚物的结晶度,DMA检测了共聚物的热学和力学性能。结果:1H NMR检测发现聚合物没有发生EC单体的均聚合和脱CO2副反应发生,所得共聚物为无规共聚物;XRD检测发现EC的含量越高Poly（EC-CL）的结晶度越低;较之聚己内酯,DMA检测发现Poly（EC-CL）玻璃化转变温度（Tg）为-35.6℃,熔点44.5℃;拉伸测试检测发现随着EC含量的增加,Poly（EC-CL）刚性的模量和强度指标大幅下降,而断裂伸长率大幅增加。结论:Poly（EC-CL）是一种力学性能可调控的新型可降解高分子材料。第二部分可降解高分子材料Poly（EC-CL）生物相容性研究目的:评价可降解高分子材料Poly（EC-CL）的生物相容性。方法:Poly（EC-CL）薄膜和浸提液进行细胞粘附试验、细胞增殖实验、溶血试验、LDH释放实验、MTS细胞毒性试验和肌肉植入试验、皮下植入试验、全身毒性试验和犬主动脉植入试验。结果:细胞粘附试验提示Poly（EC-CL）薄膜细胞粘附性较聚苯乙烯差,EC含量高的Poly（EC-CL）细胞粘附性高。MTS细胞毒性试验,实验组吸光度较阴性对照组无明显升高,P＜0.05;LDH释放试验,实验组LDH相对释放率＜10%;溶血反应,浸提液溶血率＜6%;肌肉植入试验和皮下植入试验,Poly（EC-CL）柱状物周围组织炎症反应轻微;主动脉植入试验,Poly（EC-CL）植入腹主动脉腔后6月,主动脉保持通畅。结论:Poly（EC-CL）共聚物具有良好的细胞相容性、组织相容性和血液相容性,能够作为生物医用植入材料。第三部分可降解含紫杉醇Poly（EC-CL）血管外支架的制备及体外试验目的:制备适合用于体内抗移植静脉再狭窄的含紫杉醇Poly（EC-CL）血管外支架。方法:利用静电纺织技术制备不同紫杉醇含量的Poly（EC-CL）电纺膜。通过体外降解和高效液相色谱法测定Poly（EC-CL）电纺膜的药物释放规律,并利用体外细胞试验评价不同紫杉醇含量的Poly（EC-CL）电纺膜抑制细胞增殖的作用。结果:利用静电纺织技术能够成功地制备不同紫杉醇含量的Poly（EC-CL）电纺膜。5%和10%紫杉醇含量的Poly（EC-CL）电纺膜能够持续释放紫杉醇超过3月;含紫杉醇的Poly（EC-CL）能够抑制血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和成纤维细胞增殖,且与紫杉醇含量呈正相关。10%紫杉醇Poly（EC-CL）能够明显诱导Jurkat细胞的凋亡率,P＜0.05;而1%和5%紫杉醇Poly（EC-CL）诱导Jurkat细胞的凋亡率跟阴性对照组无差异,P＞0.05。结论:5%紫杉醇含量的Poly（EC-CL）电纺膜能够抑制细胞增殖的同时无明显诱导接触细胞发生凋亡,适合制备成移植静脉血管外支架。第四部分含紫杉醇Poly（EC-CL）血管外支架抗移植静脉再狭窄的研究目的:评价5%紫杉醇含量的Poly（EC-CL）血管外支架抑制移植静脉内膜增生的作用。方法:利用毕格犬前肢浅静脉移植到后肢股浅动脉构建移植静脉模型,实验组用含5%紫杉醇的Poly（EC-CL）血管外支架包绕吻合口。于术后3月和6月行影像学检查、组织学检测和扫描电镜检查以评价移植静脉的通畅率和管壁重塑情况。结果:术后6月彩超显示实验组6例移植静脉均通畅,管壁无明显扩张;对照组5例移植静脉保持通畅,管壁无明显扩张。术后3月,扫描电镜和Ⅷ因子免疫组化染色提示实验组和对照组的血管内皮修复已经完成。术后6月,对照组移植静脉内膜厚度较实验组明显增厚。组织学检查发现平滑肌细胞、成纤维细胞、弹力纤维都参与了移植静脉管壁的重塑。结论:5%紫杉醇含量的Poly（EC-CL）血管外支架具有抑制移植静脉再狭窄和提高移植静脉通畅率的作用。