农杆菌介导的口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

论文题目: 农杆菌介导的口蹄疫抗原决定簇融合基因转化胡萝卜的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 细胞生物学

作者: 李文建

导师: 陈亮,沈明山

关键词: 口蹄疫抗原决定簇,遗传转化,胡萝卜

文献来源: 厦门大学

发表年度: 2005

论文摘要: 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的一种世界性的急性的家畜传染病。其特点是传播途径广、传染性很强、死亡率较高。利用转基因植物生产疫苗是目前植物基因工程的一个研究热点,具有生产简单、成本较低、使用安全方便、易贮存等优点。胡萝卜在我国种植广,营养丰富,可以生吃,是一种理想的研究转基因植物疫苗的载体植物。本实验通过农杆菌的介导,以携带O型和A型口蹄疫抗原决定簇融合基因O21- O14 -A21-HBcAg的植物表达载体转化胡萝卜愈伤组织;通过筛选获得潮霉素抗性愈伤组织,并再生得到抗性植株;对转化后的愈伤组织和抗性植株进行了GUS基因活性组织化学染色检测,并且对抗性植株进行了PCR、PCR-Southern、RT-PCR等分子生物学检测。所获得的试验结果如下:1.建立了胡萝卜东大品种再生系统。最佳愈伤组织诱导培养基为MS + 2,4-D 0.1 mg/L,分化培养基为不加任何激素的MS培养基,生根培养基为1/2MS +NAA 0.2 mg/L。2.通过筛选,再生获得156棵抗性植株。建立并优化了农杆菌介导的胡萝卜的遗传转化系统。实验表明,干燥预培养和抽真空能明显提高转化效率,而农杆菌液浓度、浸染时间、共培养时间的不同和添加As均不能明显影响转化效率。菌液浓度OD600 0.5～0.8、浸染时间5～10 min、共培养时间3 d对转化有利。菌液浓度OD600 0.3对胡萝卜后期筛选抑菌及其再生有利。潮霉素和羧苄青霉素对抗性愈伤再生能力具有明显的抑制作用。3. GUS染色检测和分子生物学检测结果如下:

论文目录:

中文摘要

英文摘要

略缩词

1 前言

1.1 疫苗生产系统的的概述

1.2 转基因植物疫苗的研究概况

1.3 口蹄疫转基因植物疫苗的研究概况

1.4 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

3 结果与分析

3.1 胡萝卜的再生系统

3.2 农杆菌介导的胡萝卜遗传转化系统

3.3 组织化学及分子生物学方法检测

4 讨论

5 小结

参考文献

致谢

发布时间: 2006-12-11

参考文献

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