紫杉醇亚微乳注射液的研究

论文摘要

紫杉醇抗瘤谱广、疗效确切,是目前临床上应用最广泛的化疗药之一,但其市售注射剂以聚氧乙烯蓖麻油和乙醇为溶媒,给临床使用带来严重的过敏反应和稀释后析出紫杉醇沉淀的风险。本研究的目的是制备并评价一种稳定的不含聚氧乙烯蓖麻油的紫杉醇亚微乳注射液。确立了紫杉醇的体外分析方法,以HPLC法测定紫杉醇亚微乳注射液的含量,经方法学验证符合要求;紫杉醇亲脂性极强（Ko/w=311）,在dl-α-生育酚（VE）中的溶解度最大,在脂肪酸甘油酯中的溶解度随脂肪酸碳链长度的增加而减小;紫杉醇在pH4.0,5.0,5.5,6.0缓冲盐溶液中80℃加热条件下的降解速率常数接近,其中在pH5.5缓冲盐中的降解速率常数最小,半衰期最长为19.31小时。由于含有dl-α-生育酚（Vitamin E,VE）的紫杉醇亚微乳剂被多篇文献报道更具优势且以VE为油相的紫杉醇静脉注射亚微乳剂TOCOSOL?在2005年11月被报道完成了Ⅱ期临床试验,值得进一步开发,所以本研究首先进行了油相中含有dl-α-生育酚的紫杉醇维生素E型亚微乳注射液（TPSME）的研制。采用高压均质法制备TPSME,以亚微乳剂的理化性质（外观、粒径、zeta-电位、包封率、含量）为评价指标,对影响TPSME稳定性的处方因素和主要工艺因素进行了考察。制备出的TPSME样品在6士2℃条件下放置6个月能够保持各项理化性质的稳定,但豚鼠单剂量给予TPSME5.4mg/kg,在48小时内全部死亡,推测是制剂中含有大量dl-α-生育酚的原因,所以放弃对TPSME的研究,开始研制不含VE的紫杉醇亚微乳注射液（PSME）,并对其进行体内外评价。采用高压均质法制备紫杉醇亚微乳注射液,通过处方工艺的考察,确定PSME的最终处方和制备工艺为:将Tween 80 0.2%、F68 0.2%、甘油2.5%、EDTA-2Na 0.02%加至适量注射用水中,至磁力搅拌器中75℃加热搅拌使溶解,得水相;将油酸0.05%加至MCT15%中,75℃加热搅拌混匀,得油相;将紫杉醇0.06%和大豆磷脂3%在75℃加热搅拌下溶于适量无水乙醇中,并与上述油相混合;75℃氮气流下挥干乙醇,得到澄清的含药油相;在高速分散均质机搅拌下（10,000 rpm）,将含药油相加入至水相中,继续搅拌约5分钟,制得初乳;将初乳以0.1 mol·L-1NaOH或0.1 mol·L-1HCl溶液调节pH值至5.5左右,用注射用水定容至全量,冷却至40℃左右,转移至高压均质机中,以800 bar压力均质10次;将产品装瓶,冲氮气,封口,100℃旋转水浴灭菌45min,冷水浴迅速降温即得。对PSME三批样品的外观、粒径、zeta-电位、包封率、含量、有关物质、游离脂肪酸等理化性质进行了考察。本品经60℃加速试验10天、25±2℃加速试验6个月和6±2℃条件下长期留样12个月考察,各项理化性质没有显著变化,都在合格范围内,该制剂稳定性良好。以市售紫杉醇注射液为参比,进行了PSME大鼠体内药动学及组织分布研究。PSME与市售紫杉醇注射液相比,在大鼠体内具有相似的药动学特点,药动学过程均符合双隔室模型（权重1/C）,AUC0-12h分别为:7.771±1.384μg·mL-1·h和7.052±2.023μg·mL-1·h,前者是后者的1.11倍。用相对摄取率计算,PSME在肝、脾、肺、肾的ASC0-24h仅提高了25%,28%,24%和33%,说明PSME与市售紫杉醇注射液相比在这些组织中仅有轻微蓄积,没有明显改变紫杉醇在大鼠体内的组织分布。进行了紫杉醇亚微乳注射液的安全性试验研究,结果表明:PSME无溶血和红细胞聚集作用;PSME在推荐的临床用量下对家兔耳缘静脉未见明显刺激作用;PSME重复给药未发现对豚鼠有过敏反应或毒性反应。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1 紫杉醇及其制剂的研究
• 2 亚微乳注射液的研究概况
• 3 立题目的与依据
• 参考文献
• 第一章 紫杉醇亚微乳注射液处方前研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法与结果
• 2.1 紫杉醇体外分析方法的建立
• 2.1.1 最大吸收波长的确定
• 2.1.2 色谱条件
• 2.1.3 测定法
• 2.1.4 方法专属性试验
• 2.1.5 线性关系考察
• 2.1.6 精密度、稳定性及回收率考察
• 2.2 紫杉醇的溶解性及油水分配系数
• 2.3 紫杉醇在不同pH溶液中的稳定性
• 3 本章小结
• 参考文献
• 第二章 紫杉醇维生素E型亚微乳注射液的研制
• 1 仪器、试药与动物
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 1.3 动物
• 2 剂量与规格
• 3 方法
• 3.1 制剂处方与制备工艺
• 3.2 高压均质过程及原理
• 3.3 制剂的评价指标
• 3.3.1 粒径及ζ-电位
• 3.3.2 包封率
• 3.3.3 稳定性参数Ke值
• 3.4 稳定性考察
• 3.4.1 物理稳定性
• 3.4.2 化学稳定性
• 3.5 单剂量豚鼠急性毒性试验
• 4 结果与讨论
• 4.1 处方因素的考察
• 4.1.1 油相的选择
• 4.1.2 载药量的确定
• 4.1.3 pH值的调节
• 4.2 工艺因素的考察
• 4.2.1 药物及磷脂加入方法的考察
• 4.2.2 高压均质压力和次数的考察
• 4.2.3 灭菌条件的选择
• 4.3 处方和制备工艺的确定
• 4.3.1 处方
• 4.3.2 制备工艺
• 4.4 稳定性研究
• 4.4.1 60℃加速试验结果
• 4.4.2 室温及低温长期留样稳定性
• 4.5 单剂量豚鼠急性毒性试验
• 5 本章小结
• 参考文献
• 第三章 紫杉醇亚微乳注射液处方工艺研究
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 剂量与规格
• 3 方法
• 3.1 制剂处方与制备工艺
• 3.2 高压均质过程及原理
• 3.3 制剂的评价指标
• 3.4 稳定性考察
• 4 结果与讨论
• 4.1 处方因素的考察
• 4.1.1 油相的选择
• 4.1.2 乳化剂的选择
• 4.1.3 稳定剂的选择
• 4.1.4 载药量的确定
• 4.1.5 pH值的调节
• 4.2 工艺因素的考察
• 4.2.1 药物及磷脂加入方法的考察
• 4.2.2 高压均质压力和次数的考察
• 4.2.3 灭菌条件的选择
• 4.3 处方和制备工艺的确定
• 4.3.1 处方
• 4.3.2 制备工艺
• 5 本章小结
• 参考文献
• 第四章 紫杉醇亚微乳注射液理化性质及稳定性考察
• 1 仪器与试药
• 1.1 仪器
• 1.2 试药
• 2 方法与结果
• 2.1 紫杉醇亚微乳注射液理化性质考察
• 2.1.1 外观及性状
• 2.1.2 粒径及ζ-电位
• 2.1.3 含量及包封率
• 2.1.4 有关物质
• 2.1.5 游离脂肪酸
• 2.2 紫杉醇亚微乳注射液稳定性考察
• 2.2.1 三批样品60℃加速试验
• 2.2.2 三批样品25±2℃加速试验
• 2.2.3 三批样品6±2℃长期留样试验
• 3 本章讨论
• 4 本章小结
• 参考文献
• 第五章 紫杉醇亚微乳注射液大鼠体内药动学及组织分布研究
• 1 大鼠体内药动学研究
• 1.1 仪器、试药与动物
• 1.2 测定方法的建立
• 1.2.1 色谱条件
• 1.2.2 紫杉醇对照品和内标溶液的配制
• 1.2.3 血浆样品的处理与测定
• 1.2.4 方法专属性考察
• 1.2.5 标准曲线与线性范围考察
• 1.2.6 回收率及精密度考察
• 1.3 大鼠体内药动学试验
• 1.3.1 给药方案
• 1.3.2 实验结果
• 1.3.3 结果处理
• 1.3.4 结果讨论
• 2 大鼠体内组织分布动力学研究
• 2.1 仪器、材料及动物
• 2.2 测定方法的建立
• 2.2.1 色谱条件
• 2.2.2 对照品及内标溶液配制
• 2.2.3 组织样品处理与测定
• 2.2.4 方法专属性考察
• 2.2.5 标准曲线与线性范围考察
• 2.2.6 回收率及精密度考察
• 2.3 PTX大鼠体内组织分布动力学研究
• 2.3.1 给药方案
• 2.3.2 实验结果
• 2.3.3 结果处理
• 2.3.4 结果讨论
• 3 本章小结
• 参考文献
• 第六章 紫杉醇亚微乳注射液安全性试验研究
• 1 动物、试药与仪器
• 1.1 动物
• 1.2 试药
• 1.3 仪器
• 2 方法与结果
• 2.1 溶血性试验
• 2.2 血管刺激性试验
• 2.3 豚鼠全身过敏试验
• 3 本章小结
• 参考文献
• 全文结论
• 发表文章目录
• 致谢