论文摘要
目的:丙烯醛广泛的存在于自然环境中,特别是吸烟所产生的烟雾中含有大量丙烯醛,丙烯醛还是抗癌药环磷酰胺的代谢产物,在脂质的氧化过程中也可以产生丙烯醛。国际癌症研究机构（International Agency for Research on Cancer, IARC）认为,目前尚无充分的证据表明丙烯醛对实验动物具有致癌性。另外,越来越多的证据显示丙烯醛具有遗传毒性。大量研究显示,丙烯醛在多种细胞系中可以引起活性氧（ROS）的产生,同时体内体外实验均显示丙烯醛能导致谷胱甘肽（GSH）含量的下降。丙烯醛的遗传毒性已经在很多细胞系中得到证实,但迄今尚未见到关于丙烯醛致人肝癌细胞系（HepG2）DNA损伤的研究报道。HepG2细胞保留了生物转化代谢I相酶和II相酶的活性,它被认为是检测外来化合物遗传毒性的一个理想细胞系。本研究选用HepG2细胞作为试验系统,探讨丙烯醛的DNA损伤作用及可能的机制,旨在为评估丙烯醛对人类健康的危害性提供有价值的实验室依据。方法:试验系统为HepG2细胞系。通过标准的以及蛋白酶K改良的单细胞微凝胶电泳（SCGE）试验检测细胞DNA损伤情况。为了阐明HepG2细胞中的氧化性DNA损伤机制,通过2’,7’—二氢二氯荧光素（DCFH）和苯二醛（OPT）分别测定细胞内ROS以及GSH水平。用免疫组化方法测定8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）在细胞内的表达水平。我们还研究了抗氧化物质N-乙酰半胱氨酸（NAC）的保护作用以进一步评价ROS以及GSH在丙烯醛所致的DNA链断裂中的作用。结果:当低浓度的丙烯醛（12.5-25μM）作用于细胞后,DNA的迁移距离明显增加,且呈剂量依赖关系。而当较高浓度的丙烯醛（50-100μM）作用于细胞后,DNA的迁移距离与丙烯醛在25μM时的最大迁移量相比明显缩短。暴露较高浓度丙烯醛（50-100μM）的细胞,经蛋白酶K处理后与未经蛋白酶K处理的细胞相比,DNA的迁移距离明显增加。这些结果提示,丙烯醛在较低浓度引起细胞DNA链断裂,而在较高浓度导致DNA-蛋白质交联（DPC）的形成。丙烯醛作用于HepG2细胞可引起细胞内ROS表达水平的明显增加以及GSH的耗竭,其作用剂量分别是50-100μM和25-100μM。此外,25 -100μM的丙烯醛可以明显增加HepG2细胞内8-OHdG水平。NAC（GSH的前体和细胞内ROS的清除剂）能够拮抗丙烯醛引起的DNA链断裂的形成。结论:丙烯醛可致HepG2细胞DNA损伤,其作用机制可能是通过ROS的增高以及细胞内GSH的耗竭,进而导致氧化性DNA损伤、DNA链断裂以及DPC的形成。
论文目录
相关论文文献
标签：丙烯醛论文; 单细胞凝胶微凝胶电泳试验论文; 细胞论文; 损伤论文; 氧化应激论文;