三七中皂苷的抗肿瘤及免疫佐剂活性研究

论文摘要

三七为五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的干燥根,是著名的传统中药,具有止血、散瘀、消肿、止痛等功效。现代化学和药理学研究表明三七中皂苷类成分在免疫系统、血液系统、心脑血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面均有较好的活性,是三七的主要生物活性物质。本课题测定了从三七中分离得到的8个皂苷人参皂苷Rb1（ginsenoside Rb1）、人参皂苷Re（ginsenoside Re）、人参皂苷Rd（ginsenoside Rd）、人参皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）、人参皂苷Rh1(ginsenoside Rh1、三七皂苷K（notoginsenoside K）、三七皂苷R1（notoginsenoside R1）和三七皂苷R4（notoginsenoside R4）对体外培养人宫颈癌HeLa细胞（Human cervical cancer HeLa cell,HeLa）和人结直肠癌COLO 205细胞（Human colorectal carcinoma COLO 205 cell,COLO 205）的抑制率,并对体外活性最显著的人参皂苷Rd抑制HeLa细胞增殖及诱导凋亡的作用机制进行探讨。测定三七中11个皂苷化合物的溶血性,观察这些皂苷对OVA受免小鼠细胞免疫和体液免疫应答的影响,探讨了溶血性、佐剂活性与化学结构之间的构效关系。MTT法测定Rd体外对刺激原诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应的影响,RT-PCR方法分析Rd对小鼠脾细胞IL-2、IL-4、IL-10以及INF-γ基因表达的影响,流式细胞术检测以Rd为佐剂的OVA受免小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-5、INF-γ和TNF-α等细胞因子的水平,以及血液中T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+细胞比例,初步研究了Rd的免疫佐剂活性作用机理。 1.三七中人参皂苷Rd对HeLa细胞增殖抑制及凋亡诱导作用 MTT法分析结果表明:Rb1、Re、Rg1、Rh1、Rd、K、R1和R4对体外培养的HeLa细胞和COLO 205细胞增殖均有一定程度的抑制作用,其中以Rd的活性最显著。Rd对HeLa细胞增殖的抑制作用呈良好的剂量和时间依赖性,作用48小时的IC50值为150.5±0.80μg/ml。考马斯亮蓝法测定经不同浓度Rd处理48小时HeLa细胞中总蛋白含量的结果显示Rd可显著降低HeLa细胞内蛋白质含量,并呈浓度依赖性。 Rd 180μg/ml处理48小时的HeLa细胞,姬姆萨染色后在光学显微镜下可观察到细胞染色质浓缩并靠近核膜,产生核边集、核膜裂解现象;吖啶橙染色后在荧光显微镜下观察,细胞皱缩、核浓染甚至可见浓染的碎片;电镜下观察处理细胞出现典型的凋亡超微结构变化,表现为细胞体积缩小,表面微绒毛减少或消失,胞浆浓缩,胞浆内空泡增多,细胞核染色质发生边集固缩,在核膜周边聚集形成高电子密度的质块,并

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 文献综述
• 第一章 三七化学成分及药理作用研究进展
• 第二部 分研究内容
• 第二章 三七中人参皂苷Rd对HeLa细胞增殖抑制及凋亡诱导作用研究
• 1 材料与仪器
• 2 方法
• 3 结果
• 3.1 8个皂苷化合物体外对HeLa细胞和COLO 205细胞增殖的抑制作用
• 50'>3.2 Rd对HeLa细胞生长的影响及IC₅₀
• 3.3 Rd对HeLa细胞形态学变化的影响
• 3.4 Rd对HeLa细胞总蛋白含量的影响
• 3.5 DNA琼脂糖凝胶电泳
• 3.6 Rd对HeLa细胞周期及凋亡率的影响
• 3.7 Rd对HeLa细胞bcl-2和bax蛋白表达量的影响
• 3.8 Rd对HeLa细胞跨膜电位的影响
• 3.9 DEVD-CHO对Rd处理HeLa细胞存活率的影响
• 4 讨论
• 第三章 三七中皂苷免疫佐剂活性构效关系研究
• 1 材料与仪器
• 2 方法
• 3 结果
• 3.1 11个皂苷化合物的溶血活性
• 3.2 皂苷佐剂不同使用量对OVA受免小鼠血清中特异性抗体效价的影响
• 3.3 皂苷化合物对OVA受免小鼠淋巴细胞增殖反应的影响
• 3.4 皂苷化合物对OVA受免小鼠血清中特异性抗体效价的影响
• 4 讨论
• 第四章 三七中人参皂苷Rd免疫佐剂活性作用机理研究
• 1 材料与仪器
• 2 方法
• 3 结果
• 3.1 Rd体外对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响
• 3.2 Rd体外对小鼠脾细胞细胞因子mRNA表达水平的影响
• 3.3 Rd对OVA受免小鼠血清中Th1／Th2细胞因子含量的影响
• +／CD8⁺比例的影响'>3.4 Rd对OVA受免小鼠血液淋巴细胞亚群CD4⁺／CD8⁺比例的影响
• 4 讨论
• 参考文献
• 附图
• 主要缩略词
• 发表论文
• 致谢