论文摘要
目的：1．探讨E1A基因对宫颈癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影响及相关机制。2．为提高宫颈癌的放射治疗疗效提供实验依据，并为肿瘤的基因治疗提供初步理论依据。方法：细胞培养：人宫颈癌HeLa细胞在37℃，5％CO2条件下培养于含10％小牛血清，RPMI-1640培养液的培养瓶，将对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞接种于裸鼠右侧肩胛下皮下，每只接种2×106个细胞，建立裸鼠移植瘤模型。每日观察肿瘤生长情况，每三天测量一次肿瘤的长短径，计算肿瘤体积，V=1／2×（ab2）。分组处理：待每组肿瘤平均直径约10mm时，随机将裸鼠分为三组，E1A实验组：瘤内注射EIA质粒与PEI-Fe3O4纳米粒的胶体溶液0.2ml：空载体对照组：瘤内注射PEI-Fe3O4纳米粒空载体0.2ml：空白对照组：瘤内注射无菌生理盐水0.2ml。两天后开始放疗：将每组裸鼠分别进行照射，6-MV X-ray源皮距100cm 2Gy／次×5天，剂量率2Gy／min，总剂量10Gy，每天观察肿瘤缩小情况，同样每三天测量一次肿瘤体积，处死前测瘤体积，算出每组肿瘤缩小率=（放疗前平均瘤体积-放疗后平均瘤体积）／放疗前平均瘤体积；处死裸鼠取标本称瘤重，算出各组平均瘤重。标本制成病理切片，TUNEL法测瘤组织中细胞凋亡情况，计算每组的凋亡指数；免疫组化测survivin蛋白表达。结果：1．接种HeLa细胞后第7天开始成瘤，至第12天成瘤率达100％。2．照射前E1A组，纳米粒空载体组，空白对照组肿瘤体积分别为：302.28±37.48 mm3，326.57±57.34 mm3，317.95±86.93 mm3，照射结束后，处死裸鼠前E1A组，纳米粒空载体组，空白对照组肿瘤体积分别为46.50±29.04 mm3，222.4±37.47 mm3，202.83±67.51mm3，肿瘤缩小率分别为84.62±14.25％，31.90±8.42％，36.21±7.76％。瘤重分别为：148.1±69.7mg，434.9±38.7mg，394.3±88.6mg，E1A组肿瘤缩小率明显高于对照组，瘤重明显低于对照组，有统计学意义（p＜0.05），空载体组与空白对照组比较无明显差异（p＞0.05）。3．TUNEL法测不同组中细胞凋亡情况，E1A组中凋亡细胞明显多，凋亡指数为32.07±4.48％，而空载体组及空白对照组中凋亡细胞明显少，分别为13.93±1.31％，14.02±0.98％，有统计学意义（p＜0.05）。4．免疫组化测组织中survivin的表达，E1A组中survivin蛋白表达呈弱阳性，而空载体组及空白对照组中survivin蛋白表达呈强阳性。结论：1．E1A基因能增加宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤的放射敏感性。2．E1A基因通过下调宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤中survivin的表达而促进细胞凋亡，可能为E1A基因增加放射敏感性的机制之一。