论文题目: Rapamycin在肝硬化大鼠小体积肝移植模型中对缺血再灌注损伤的保护作用及对肝脏星状细胞的激活和Rho-ROCK通路的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 普通外科学
作者: 苏明
导师: 黄志强
关键词: 供肝损伤,肝星状细胞,肝移植
文献来源: 中国人民解放军军医进修学院
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:在肝硬化大鼠小体积肝移植模型的基础上,研究药物Rapamycin对于肝硬化大鼠小体积肝移植术后供肝损伤所能起到的作用;探讨肝硬化大鼠小体积肝移植术后供肝损伤中,Rho-ROCK信号通路及肝星状细胞的激活所起的作用。通过动物实验初步揭示药物Rapamycin的作用及相关机理,为今后进一步的实验研究及该药物的临床应用提供初步的数据。 方法:1.肝硬化大鼠小体积肝移植模型的建立 雄性健康Sprague-Dawley大鼠（330-380g）作为供体;雄性肝纤维化Sprague-Dawley大鼠（430-520g）作为受体。肝纤维化模型建立方法如下:雄性Sprague-Dawley大鼠,自出生后第六周起,每周两次皮下注射CCL4,剂量1ml·kg-1·次-1（溶于等体积橄榄油中）,共持续8周。2.实验分组 实验分为两组,小肝对照组（n=30）、小肝用药组（n=30）。各组在每一时间点上各包括6对大鼠肝移植。于再灌注后6、24、48小时取肝脏组织及血样进行相关指标的检测。各组均用12对大鼠来观察7天生存率。用药组的给药方法为:Rapamycin溶液由大鼠阴茎静脉推入（0.2mg/kg/次）。受体大鼠在术前24小时、麻醉之后开腹之前及再灌注之后分别给药一次;供体大鼠麻醉之后开腹之前给药一次。3.实验室研究 3.1 Masson’s染色:受体大鼠肝脏用10%福尔马林液固定,常规石蜡制片,应用Masson染色法将胶原纤维染为绿色以观察肝脏纤维化的程度。3.2 免疫组织化学染色检测α-SMA的表达 切片经脱蜡水化后,用1%H2O2灭活内原性过氧化物酶,加入30%小牛血清30分钟以减少非特异性的背景染色,加入α-SMA单克隆抗体（DAKO公司）,于4℃过夜。漂洗、加入二抗（DAKO公司）、显色、苏木素复染、乙醇和二甲苯脱水。阴性对照用PBS代替α-SMA单克隆抗体。3.3 ROCK I、Rho及VEGF的Western免疫印迹反应检测 提取各时间点肝脏标本的总蛋白,匀浆、裂解、取上清液、加热变性、电泳、转膜、曝光、呈像分析,检测各蛋白的表达水平。3.4 肝功能的检测:采集再灌注后6、24、48小时血样,测定血清天门冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）的变化。 结果:1.成功建立肝硬化大鼠小体积肝移植模型 用Masson染色法将供体大鼠
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
正文
第一章 材料及方法
第二章 结果
第三章 讨论
参考文献
综述
附录
在读期间发表论文及著作
致谢
发布时间: 2005-07-15
参考文献
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