论文摘要
目的：恶性肿瘤是严重威胁人类健康及生命的常见病，也是世界医学的一大难题。目前，主要采用手术、放疗、化疗及生物治疗等综合措施。对于中晚期恶性肿瘤患者，作为其主要治疗手段的化疗，虽然疗效肯定，但是由于其毒副作用大、价格昂贵，且存在多药耐药等问题，常导致病人机体状况的恶化及生命质量的降低，严重时致患者因不能耐受而放弃治疗。而中药尤其是中药复方治疗肿瘤从整体考虑，具有药源广泛、价格低廉、毒副作用小等优点。中药化学通过对单味中药或复方中药进行提取、分离、纯化、结构鉴定，寻找药物活性成分，是获得新的抗癌药物的重要途径，也正在成为抗肿瘤药物研究的热点。抑瘤宁为纯中药复方制剂，由Rab、Aca、Sol、Duc组成，临床用于治疗消化系统肿瘤，疗效肯定，无明显毒副作用。根据本课题组前期对四味中药粗提物实验结果，Rab与Due两药联用和Rab、Aca、Sol、Duc四药联用体外能明显地抑制消化系统肿瘤细胞的生长；四药联用时，能使Eca-109细胞阻滞于S期，并诱导细胞凋亡。迄今尚未对其有效抗肿瘤成分进行药效学实验研究，方剂组成及用药剂量尚待通过实验进行优选。本实验以人食管癌Eca-109、人胃癌BGC-823、人肝癌Bel-7402、人结肠癌Ls-174t细胞为实验对象进行体外抗肿瘤实验，通过文献查阅，从Rab中选取成分A—Oridonin，Aca中选取成分B—ASS（Acanthopanax Senticosus），Sol中选取成分C—Solanine，Duc中选取成分D—Ducheside，以A为主要成分，与B、C、D进行两联、三联、四联等组合，根据细胞毒性最大、药物剂量最小的原则从中筛选出最佳的药物组合。方法：1．MTT法测定各实验组对Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t细胞的生长抑制率。取对数生长期的细胞，接种于96孔板上培养24h后，设空白对照组和实验组，每个浓度设6个平行孔重复三次，分别作用于Eca-109、BGC-823、Bel-7402、LS-174t细胞48h，测定细胞生长抑制率。2．用倒置显微镜观察药物作用于Eca-109细胞48h后的形态学变化。3．用流式细胞仪检测Eca-109细胞周期分布和凋亡率。4．统计学分析采用统计软件SPSS10.0，采用单因素方差分析及χ2检验对数据进行分析，以α=0.05为检验水准。结果：1．对Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t细胞的生长抑制作用。1．1对Eca-109细胞的生长抑制作用。以两药联用“A（10μg／mL）+B（1mg／mL）”，三药联用“A（15μg／mL）+B（1mg／mL）+C（0.4mg／mL）”、“A（10μg／mL）+B（1mg／mL）+D（3.2mg／mL）”，四药联用“A（10μg／mL）+B（0.5mg／mL）+c（0.4mg／mL）+D（1.6mg／mL）”时细胞生长抑制率最高，可达100％。1．2对BGC-823细胞的生长抑制作用。以两药联用“A（20μg／mL）+B（1mg／mL）”，三药联用“A（20μg／mL）+B（1mg／mL）+C（0.8mg／mL）”、“A（30μg／mL）+B（1mg／mL）+D（3.2mg／mL）”，四药联用“A（15μg／mL）+B（0.75mg／mL）+C（0.4mg／mL）+D（3.2mg／mL）”时细胞生长抑制率最高，可达100％。1．3对Bel-7402细胞的生长抑制作用。两药联用以“A（15μg／mL）+B（2mg／mL）”抑制率最高，为90.80％；三药联用以“A（30μg／mL）+B（1mg／mL）+C（1.6mg／mL）”抑制率最高，为76.31％；四药联用以“A（20μg／mL）+B（1mg／mL）+C（0.4mg／mL）+D（3.2mg／mL）”时细胞生长抑制率最高，可达94.23％。1．4对Ls-174t细胞的生长抑制作用。两药联用以“A（30μg／mL）+B（1mg／mL）”抑制率最高，为31.46％；三药联用以“A（20μg／mL）+B（1mg／mL）+C（0.8mg／mL）”抑制率最高，为28.76％；四药联用以“A（20μg／mL）+B（1mg／mL）+C（0.8mg／mL）+D（1.6mg／mL）”时细胞生长抑制率最高，可达36.54％。2．用流式细胞仪检测Eca-109细胞周期分布和凋亡率。各实验组作用于细胞48h后，S期细胞百分率明显升高，G0／G1期细胞百分率明显下降。呈现凋亡所特有的亚G1峰，凋亡率升高，与空白对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：1．A与B两药联用或A、B、C与D四药联用都能明显的抑制Eca-109、BGC-823、Bel-7402、Ls-174t细胞的生长。2．A、B两药联用或A、B、C与D四药联用时，能使Eca-109细胞阻滞于S期，并诱导细胞凋亡。3．抑瘤宁中有效抗癌成分的最佳组成是A与B两药联用或A、B、C和D四药联用，此结果为该方剂进一步的实验和临床应用提供了理论依据。