基于果蝇模式生物五味子醇甲改善睡眠的作用及其机制研究

论文摘要

目的：探讨五味子醇甲改善睡眠的作用机制。方法：1.五味子醇甲对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇24h睡眠时间与睡眠—觉醒节律的影响。收集12h内刚羽化未交配的果蝇,CO2麻醉后,雌雄分开,分别移入含基础培养基的指管中饲养。饲养6天后,分别选取雌雄果蝇随机分为空白组和给药组,雌雄每组各32只。晚7点前将果蝇移入含培养基的监测管中,空白组移入含空白液体培养基的监测管中,给药组移入含五味子醇甲培养基的监测管中,每支监测管进一只果蝇,适应12h。应用果蝇活动监测系统（DAMS）,于第7天早7：00开始至第8天早7：00结束,对果蝇24h睡眠活动进行连续监测,记录果蝇24h睡眠时间和睡眠-觉醒节律。2.五味子醇甲对光刺激剥夺睡眠的7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇24h睡眠时间与睡眠—觉醒节律的影响。收集12h内刚羽化未交配的果蝇,CO2麻醉后,雌雄分开,分别移入含基础培养基的指管中饲养。饲养6天后,分别选取雌雄果蝇随机分为空白组、剥夺组和给药组,雌雄每组各32只。晚7点前将果蝇移入监测管中,空白组和剥夺组移入含空白液体培养基的监测管中,给药组移入含五味子醇甲培养基的监测管中,每支监测管进一只果蝇,适应12h。空白组置于正常培养环境中,剥夺组和给药组置于光剥夺箱中。应用果蝇活动监测系统（DAMS）,于第7天早7：00开始至第8天早7：00结束,对果蝇24h睡眠活动进行连续监测,记录果蝇24h睡眠时间和睡眠-觉醒节律。3.酪氨酸羟化酶抑制剂（3-iodo-L-tyrosine）对7日龄野生型CantonS品系黑腹果蝇24h睡眠时间影响的量效关系研究。收集12h内刚羽化未交配的果蝇,CO2麻醉后,雌雄分开,分别移入含基础培养基的指管中饲养。饲养6天后,分别选取雌雄果蝇随机分为空白组和不同剂量给药组,雌雄每组各32只。晚7点前将果蝇移入监测管中,空白组移入含空白液体培养基的监测管中,给药组移入含不同剂量药物培养基的监测管中,每支监测管进一只果蝇,适应12h。应用果蝇活动监测系统（DAMS）,于第7天早7：00开始至第8天早7：00结束,对果蝇24h睡眠活动进行连续监测,记录果蝇24h睡眠时间4.五味子醇甲与酪氨酸羟化酶抑制剂（3-iodo-L-tyrosine）联合用药对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇睡眠时间和睡眠-觉醒节律的影响。收集12h内刚羽化未交配的果蝇,CO2麻醉后,雌雄分开,分别移入含基础培养基的指管中饲养。饲养6天后,分别选取雌雄果蝇随机分为空白组、五味子醇甲组、抑制剂组和联合组,雌雄每组各32只。晚7点前将果蝇移入监测管中,空白组移入含空白液体培养基的监测管中五味子醇甲组移入含五味子醇甲培养基的监测管中,抑制剂组移入含抑制剂培养基的监测管中。联合1组于早晨先将果蝇移入含五味子醇甲的监测管中,晚7点前再移入含抑制剂的监测管中。联合2组于早晨先将果蝇移入含抑制剂的监测管中,晚7点前再移入含五味子醇甲的监测管中。每支监测管进一只果蝇,适应12h。应用果蝇活动监测系统（DAMS）,于第7天早7：00开始至第8天早7：00结束,对果蝇24h睡眠活动进行连续监测,记录果蝇24h睡眠时间和睡眠-觉醒节律。5.左旋多巴（3,4-Dihydroxy-L-phenylalanine）对7日龄野生型CantonS品系黑腹果蝇睡眠时间影响的量效关系研究。收集12h内刚羽化未交配的果蝇,CO2麻醉后,雌雄分开,分别移入含基础培养基的指管中饲养。饲养6天后,分别选取雌雄果蝇随机分为空白组和不同剂量给药组,雌雄每组各32只。晚7点前将果蝇移入监测管中,空白组移入含空白液体培养基的监测管中,给药组移入含不同剂量药物培养基的监测管中,每支监测管进一只果蝇,适应12h。应用果蝇活动监测系统（DAMS）,于第7天早7：00开始至第8天早7：00结束,对果蝇24h睡眠活动进行连续监测,记录果蝇24h睡眠时间。6.五味子醇甲与阈下剂量左旋多巴（3,4-Dihydroxy-L-phenylalanine）联合用药对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇睡眠时间和睡眠-觉醒节律的影响。收集12h内刚羽化未交配的果蝇,CO2麻醉后,雌雄分开,分别移入含基础培养基的指管中饲养。饲养6天后,分别选取雌雄果蝇随机分为空白组、五味子醇甲组、左旋多巴组和联合组,雌雄每组各32只。晚7点前空白组移入含空白液体培养基的监测管中,五味子醇甲组移入含五味子醇甲培养基的监测管中,左旋多巴组移入含左旋多巴培养基的监测管中。联合组于早晨先将果蝇移入含左旋多巴的监测管中,晚7点前再移入含五味子醇甲的监测管中。每支监测管进一只果蝇,适应12h。应用果蝇活动监测系统（DAMS）,于第7天早7：00开始至第8天早7：00结束,对果蝇24h睡眠活动进行连续监测,记录果蝇24h睡眠时间和睡眠-觉醒节律。7.五味子醇甲对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇头部多巴胺含量的影响。收集12h内刚羽化未交配的果蝇,CO2麻醉后,雌雄分开,分别移入含基础培养基的指管中饲养。饲养6天后,分别选取雌雄果蝇随机分为空白组和给药组,雌雄每组各50只。给药一天后,于第7天用液氮冷冻果蝇取其头部,放入冻存管中保存,每管40个果蝇头。将果蝇头部移入手动匀浆器中,加入500μl生理盐水匀浆至头部全部破碎,3000转离心10min,取上清液。采用酶联免疫法测定多巴胺含量。结果：1.五味子醇甲组与空白组比较雌雄果蝇睡眠时间显著缩短。节律图表明,雌雄果蝇白天睡眠时间减少,但连续性增强；夜间活动增加,睡眠连续性减弱。2.雌果蝇给药组睡眠时间与剥夺组比较无显著性差异。雄果蝇给药组与剥夺组比较睡眠显著缩短。节律图表明,雄果蝇给药组夜间睡眠表现为剥夺睡眠后活动时间延长。3.酪氨酸羟化酶抑制剂（3-iodo-L-tyrosine）0.4mg/ml～3.2mg/ml给药1天,显著延长7日龄雌果蝇睡眠时间。1.6mg/m1～3.2mg/ml给药1天,显著延长7日龄雄果蝇睡眠时间。4.7日龄雌雄果蝇联合1组的睡眠时间与五味子醇甲组、抑制剂组的比较均无显著性差异；7日龄雌雄果蝇联合2组的睡眠时间与五味子醇甲组、抑制剂组比较均有显著性差异。节律图表明,雌果蝇联合1组、联合2组与抑制剂组比较,夜间活动增加；联合1组与联合2组比较,白天活动增加。雄果蝇联合1组与联合2组比较夜间活动次数增加。5.左旋多巴（3,4-Dihydroxy-L-phenylalanine）0.4mg/ml给药1天显著减少7日龄雌性果蝇睡眠时间,其阈下剂量为0.2mg/ml；0.2mg/ml给药1天,显著减少7日龄雄性果蝇睡眠时间,其阂下剂量为0.1 mg/m1。6.7日龄雌性果蝇联合组与五味子醇甲组比较,总睡眠时间无显著性差异,但显著增加白天睡眠时间,显著缩短夜间睡眠时间。联合组与左旋多巴组比较,显著减少总睡眠时间。联合组与五味子醇甲组、左旋多巴组比较显著增加睡眠次数。7日龄雄性果蝇联合组与五味子醇甲组、左旋多巴组比较显著缩短总睡眠时间和白天睡眠时间,显著减少睡眠次数与左旋多巴组比较显著减少平均睡眠持续时间。节律图表明,雌果蝇联合组与五味子醇甲组、左旋多巴组比较,夜间睡眠呈现片段化；雄果蝇联合组与五味子醇甲组、左旋多巴组比较白天活动时间增加。7.五味子醇甲组与空白组比较多巴胺含量减少,但无显著性差异结论：1.五味子醇甲能缩短7日龄果蝇的睡眠时间,使白天睡眠连续性增强。2.五味子醇甲对光刺激睡眠剥夺果蝇睡眠的影响表现为剥夺睡眠后活动时间延长。3.酪氨酸羟化酶抑制剂（3-iodo-L-tyrosine）0.4mg/ml为延长7日龄雌性果蝇睡眠时间的最佳剂量,1.6mg/m1是延长7日龄雄性果蝇睡眠时间的最佳剂量。4.联合1组不能影响抑制剂对7日龄雌雄果蝇睡眠的延长作用；联合2组能缩短抑制剂对果蝇睡眠时间的延长。5.左旋多巴（3,4-Dihydroxy-L-phenylalanine） 0.4mg/ml为缩短7日龄雌性果蝇睡眠时间的最佳剂量,0.2mg/ml为缩短7日龄雄性果蝇睡眠时间的最佳剂量。6.五味子醇甲联合阈下剂量左旋多巴加重缩短果蝇的24h睡眠时间。7.五味子醇甲减少7日龄雌雄果蝇头部的多巴胺含量。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 综述
• 一、果蝇的生物学特性
• 1. 果蝇的生活周期
• 2. 果蝇的遗传学特征
• 3. 果蝇的神经系统
• 二、果蝇作为模式生物的历史及现状
• 1. 模式生物的定义
• 2. 果蝇作为模式生物的优势
• 3. 果蝇作为模式生物的历史及现状
• 4. 果蝇作为模式生物在生物学研究中的意义
• 三、果蝇作为模式生物在睡眠研究中的应用
• 1. 利用果蝇作为睡眠研究的模式生物
• 2. 果蝇的昼夜节律
• 3. 果蝇睡眠的测定方法
• 四、睡眠发生机制中多巴胺的作用
• 1. 多巴胺的分布与代谢
• 2. 多巴胺与睡眠-觉醒
• 3. 多巴胺对果蝇的影响
• 五、五味子醇甲研究现状
• 1. 五味子药材来源
• 2. 五味子醇甲的理化性质
• 3. 五味子醇甲药理作用研究
• 六、本课题研究思路与技术路线
• 实验部分
• 第一部分五味子醇甲对7日龄野生型CatnonS品系黑腹果蝇24h睡眠 时间与睡眠一觉醒节律的影响
• 第二部分 五味子醇甲对光刺激剥夺睡眠的7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇24h睡眠时间与睡眠—觉醒节律的影响
• 第三部分 酪氨酸羟化酶抑制剂（3-iodo-L-tyrosine）对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇24h睡眠时间影响的量效关系研究
• 第四部分 五味子醇甲与酪氨酸羟化酶抑制剂（3-iodo-L-tyrosine）联合用药对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇24h睡眠时间和睡眠-觉醒节律的影响
• 第五部分 左旋多巴（3,4-Dihydroxy-L-phenylalanine）对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇24h睡眠时间影响的的量效关系研究
• 第六部分 五味子醇甲与阈下左旋多巴（3,4-Dihydroxy-L-phenyla-lanine）联合用药对7日龄野生型Cant on S品系黑腹果蝇24h睡眠时间和睡眠-觉醒节律的影响
• 第七部分 五味子醇甲对7日龄野生型Canton S品系黑腹果蝇脑头部多巴胺含量的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 个人简历