RAD001对PIK3CA基因及KRAS基因不同类型人肺NSCLC细胞放射增敏作用研究

论文摘要

目的:探讨mTOR蛋白抑制剂RAD001在NSCLC放疗中的作用,研究其放射增敏作用与PIK3CA基因和KRAS基因状态的关系。方法:体外培养EGFR野生型酪氨酸激酶抑制剂（TKI）耐药的人肺非小细胞肺癌细胞株,其中NCI-H661细胞为PIK3CA和KRAS基因双野生型,NCI-H460细胞为PIK3CA和KRAS基因双突变型。应用MTT法分别检测RAD001对两株细胞的半数抑制浓度（IC50）,确定药物增敏剂量。应用RAD001作用24h后联合及单独进行X线0、2、4、6、8Gy照射,分别计算两株细胞克隆存活分数,多靶单击模型拟合生存曲线,计算D0、Dq、SF2及SER参数。应用免疫荧光共聚焦分别观察两株细胞RAD001干预组及单纯照射组X线4Gy照射后0m、30m、60m、4h、12h、24hγ-H2AX蛋白表达变化情况。应用western blot进行p-p70S6K及γ-H2AX蛋白检测及灰度值定量。结果:MTT法检测RAD001对两株细胞的半抑制浓度（IC50）分别为:NCI-H661 （23.101±0.056）nM和NCI-H460 （61.894±0.049）nM,经加权概率法分析存在显著性差异（p﹤0.05）。NCI-H661细胞单纯照射组及RAD001干预组D0、Dq、SF2分别为2.244,1.927,0.712及1.596,1.369,0.548,SER为1.406。NCI-H460细胞单纯照射组及RAD001干预组D0、Dq、SF2分别为2.412,2.894,0.851及2.359,1.848,0.706,SER为1.022。免疫荧光共聚焦显微镜检测显示NCI-H661细胞RAD001干预组24h时间点γ-H2AX焦点残留增多,NCI-H460细胞中未发现类似改变。RAD001作用24h后两株细胞p-p70S6K蛋白表达量均较未加药组降低。NCI-H661细胞RAD001干预组较单纯照射组24h时间点γ-H2AX蛋白表达量增加,NCI-H460细胞RAD001干预组γ-H2AX蛋白表达在30m时间点出现高峰。结论:RAD001对人肺非小细胞肺癌细胞株具有放射增敏作用,RAD001的放射增敏作用与PIK3CA和KRAS基因的状态有关,PIK3CA和KRAS基因双野生型的增敏效果较双突变型好。

论文目录

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• （一） 前言
• （二） 材料与方法
• （三） 结果
• （四） 讨论
• （五） 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢