导读:本文包含了血管芽生论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:DLL4,Notch,肿瘤血管生成,尖端细胞,柄细胞
血管芽生论文文献综述
田超,周梁,刘兆国,朱智杰,王爱云[1]（2012）在《DLL4/Notch信号通路在肿瘤血管芽生过程中作用研究进展》一文中研究指出出芽式血管生成是肿瘤血管生成中最主要的一种方式,出芽的血管内皮细胞分化具有不同特性的尖端细胞(tip cell)和柄细胞(stalk cel 1),两种细胞在肿瘤分泌的生长因子作用下以不同的方式促进肿瘤血管增殖延长,形成分枝血管,为肿瘤供氧。DLL4/Notch信号通路是调节血管出芽分枝的关键因素,其通过与VEGF信号通路的交互作用影响尖端细胞和柄细胞的迁移和增殖等行为,从而调节肿瘤血管芽生过程,是抗肿瘤血管生成研究中的重(本文来源于《中华中医药学会中药实验药理分会2012年学术年会论文摘要汇编》期刊2012-10-20）
杨汉东[2]（2012）在《丝/苏氨酸蛋白激酶Pim-3被肿瘤坏死因子-α调节并促进血管内皮细胞芽生》一文中研究指出血管的生成是指从成熟血管生长出新的血管的过程,是炎症发生时的重要事件。多种生物因子可以激活血管内皮细胞中的信号分子,促进血管生成。研究发现,炎症时的血管生成与肿瘤性血管生成在细胞行为学上有很多相似之处。但是,有更多的证据显示参与炎症性血管生成时的信号分子、血管生成因子不同于参与其他类型的血管生成的信号分子。研究显示肿瘤坏死因子-α是影响血管内皮细胞迁移的重要炎症分子,参与调节血管生成。Pim家族是一类新发现的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,包括Pim-1, Pim-2, Pim-3叁种亚型,能影响生长因子依赖或非依赖性细胞凋亡过程。最近研究发现Pim激酶在心血管细胞的存活中发挥重要作用。Pim作为一种VEGF的反应基因,参与调节球囊损伤后的血管平滑肌细胞的增殖和心肌损伤后的细胞保护作用,还参与调节胚胎干细胞向内皮细胞的分化。Pim-3在血管内皮细胞上高表达,参与影响内皮细胞的迁移、增殖行为,在维持内皮细胞稳态中发挥重要生物学作用。本课题研究了Pim-3基因表达与肿瘤坏死因子-α的调节关系,并探讨了Pim-3基因在内皮细胞芽生中的生物学作用。第一部分：小鼠Pim-3基因RNA干扰慢病毒载体制备[目的]慢病毒(Lentivirus)载体以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础,是目前有发展前景的基因治疗载体。它在体内较长期的表达,可以感染分裂细胞和非分裂细胞。本研究拟构建针对小鼠Pim-3基因的RNA干扰慢病毒,感染小鼠源靶细胞,检测对内源性Pim-3基因表达的沉默效果,为随后开展的相关研究做基础。[方法]针对小鼠Pim-3基因序列,按照RNA干扰序列设计原则,设计多个潜在起干扰效应的RNA干扰靶点序列。合成含干扰序列的双链发夹DNA寡核苷酸片段。在DNA的末端加上粘性酶切位点,然后与酶切后的RNA干扰载体连接。将产物转化入感受态细菌中,并进行PCR鉴定。进一步扩增阳性克隆。随后用Lipofectamine2000将重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞。收集并浓缩含慢病毒颗粒的细胞上清。在293T细胞中测定病毒滴度。用慢病毒感染靶细胞,采用RT-PCR的方法及蛋白免疫印迹技术检测Pim-3基因的mRNA及蛋白表达情况。[结果]本研究运用双酶切法得到线性化慢病毒vshRNA载体,并将针对共四个靶点的DNA双链片段连接到线性化的pGCSIL-GFP载体。运用菌落PCR技术鉴定阳性克隆后分别得到4个针对第一靶点、5个针对第二靶点、4个针对第叁靶点和第四靶点的阳性克隆。将重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞后得到病毒颗粒,滴度分别均为2E+9(TU/mL)。用慢病毒颗粒感染小鼠NIH3T3细胞,用Real-time PCR检测结果显示：NIH3T3细胞中,四个靶点中,KD1, KD4对NIH3T3目的基因的表达的敲减效率达到70%以上,为有效靶点。选择靶点一病毒,即Pim3-RNAi-LV-1进行随后实验。蛋白免疫印迹分析技术验证Pim3-RNAi-LV-1对内源性Pim-3基因蛋白水平沉默效率达到80%以上。[结论]本研究成功构建得到较高滴度慢病毒,并能有效沉默目的细胞中的Pim-3基因表达。第二部分：丝／苏氨酸蛋白激酶Pim-3被肿瘤坏死因子-α调节并促进血管内皮细胞芽生[目的]前期研究证实Pim-3在血管内皮细胞迁移与增殖中发挥重要作用,本研究则进一步探讨炎症分子肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中Pim-3基因表达的影响,并证实Pim-3在血管内皮细胞芽生中的生物学作用。[方法]体外培养血管内皮细胞,用不同剂量TNF-α刺激内皮细胞不同时间,提取总RNA,运用RT-PCR技术检测Pim-3基因表达变化；合成针对TNF-α受体1和受体2特异的干扰片段,运用脂质体转染血管内皮细胞,敲低目的基因的表达水平,在此基础上观察TNF-a对Pim-3基因表达的影响；运用TNFR1中和抗体阻断TNF-α的受体1信号,并观察TNF-α对Pim-3基因表达的影响。运用放线菌素D阻断细胞mRNA合成,观察TNF-α处理后Pim-3基因mRNA稳定性的大小。运用细胞刮擦损伤实验观察内皮细胞丝状伪足形成能力；运用基质胶皮下植入实验研究在体条件下内皮细胞芽生能力。[结果](1)肿瘤坏死因子-α能够剂量依赖性促进血管内皮细胞中Pim-3mRNA表达,其对Pim-3mRNA表达的调节是瞬时性的,在1.5小时到2小时达到高峰。(2)TNF-α通过TNFR1促进血管内皮细胞中Pim-3mRNA表达,TNFR1中和抗体抑制TNF-a诱导的Pim-3mRNA表达。(3)PI3K、MAPK、ERK、NFκB、JNK信号通路阻断剂能不同程度增加内皮细胞Pim-3表达,而且都不能阻断TNF-a对Pim-3表达的调节作用。(4)TNF-a能够增加血管内皮细胞中Pim-3mRNA稳定性。(5)Pim-3基因沉默抑制]TNF-a诱导的培养内皮细胞丝状伪足的形成,Pim-3基因沉默抑制在体条件下得血管内皮细胞芽生。(6)Pim-3基因沉默降低内皮细胞中eNOS基因含量。[结论]血管内皮细胞中的丝/苏氨酸蛋白激酶Pim-3是TNF-α的靶基因,TNFR1介导了TNF-a对Pim-3的mRNA稳定性调节作用,Pim-3可能是炎症性血管生成过程中的重要信号分子。(本文来源于《武汉大学》期刊2012-04-01）
血管芽生论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
血管的生成是指从成熟血管生长出新的血管的过程,是炎症发生时的重要事件。多种生物因子可以激活血管内皮细胞中的信号分子,促进血管生成。研究发现,炎症时的血管生成与肿瘤性血管生成在细胞行为学上有很多相似之处。但是,有更多的证据显示参与炎症性血管生成时的信号分子、血管生成因子不同于参与其他类型的血管生成的信号分子。研究显示肿瘤坏死因子-α是影响血管内皮细胞迁移的重要炎症分子,参与调节血管生成。Pim家族是一类新发现的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,包括Pim-1, Pim-2, Pim-3叁种亚型,能影响生长因子依赖或非依赖性细胞凋亡过程。最近研究发现Pim激酶在心血管细胞的存活中发挥重要作用。Pim作为一种VEGF的反应基因,参与调节球囊损伤后的血管平滑肌细胞的增殖和心肌损伤后的细胞保护作用,还参与调节胚胎干细胞向内皮细胞的分化。Pim-3在血管内皮细胞上高表达,参与影响内皮细胞的迁移、增殖行为,在维持内皮细胞稳态中发挥重要生物学作用。本课题研究了Pim-3基因表达与肿瘤坏死因子-α的调节关系,并探讨了Pim-3基因在内皮细胞芽生中的生物学作用。第一部分：小鼠Pim-3基因RNA干扰慢病毒载体制备[目的]慢病毒(Lentivirus)载体以人类免疫缺陷型病毒(HIV)为基础,是目前有发展前景的基因治疗载体。它在体内较长期的表达,可以感染分裂细胞和非分裂细胞。本研究拟构建针对小鼠Pim-3基因的RNA干扰慢病毒,感染小鼠源靶细胞,检测对内源性Pim-3基因表达的沉默效果,为随后开展的相关研究做基础。[方法]针对小鼠Pim-3基因序列,按照RNA干扰序列设计原则,设计多个潜在起干扰效应的RNA干扰靶点序列。合成含干扰序列的双链发夹DNA寡核苷酸片段。在DNA的末端加上粘性酶切位点,然后与酶切后的RNA干扰载体连接。将产物转化入感受态细菌中,并进行PCR鉴定。进一步扩增阳性克隆。随后用Lipofectamine2000将重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞。收集并浓缩含慢病毒颗粒的细胞上清。在293T细胞中测定病毒滴度。用慢病毒感染靶细胞,采用RT-PCR的方法及蛋白免疫印迹技术检测Pim-3基因的mRNA及蛋白表达情况。[结果]本研究运用双酶切法得到线性化慢病毒vshRNA载体,并将针对共四个靶点的DNA双链片段连接到线性化的pGCSIL-GFP载体。运用菌落PCR技术鉴定阳性克隆后分别得到4个针对第一靶点、5个针对第二靶点、4个针对第叁靶点和第四靶点的阳性克隆。将重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞后得到病毒颗粒,滴度分别均为2E+9(TU/mL)。用慢病毒颗粒感染小鼠NIH3T3细胞,用Real-time PCR检测结果显示：NIH3T3细胞中,四个靶点中,KD1, KD4对NIH3T3目的基因的表达的敲减效率达到70%以上,为有效靶点。选择靶点一病毒,即Pim3-RNAi-LV-1进行随后实验。蛋白免疫印迹分析技术验证Pim3-RNAi-LV-1对内源性Pim-3基因蛋白水平沉默效率达到80%以上。[结论]本研究成功构建得到较高滴度慢病毒,并能有效沉默目的细胞中的Pim-3基因表达。第二部分：丝／苏氨酸蛋白激酶Pim-3被肿瘤坏死因子-α调节并促进血管内皮细胞芽生[目的]前期研究证实Pim-3在血管内皮细胞迁移与增殖中发挥重要作用,本研究则进一步探讨炎症分子肿瘤坏死因子-α对内皮细胞中Pim-3基因表达的影响,并证实Pim-3在血管内皮细胞芽生中的生物学作用。[方法]体外培养血管内皮细胞,用不同剂量TNF-α刺激内皮细胞不同时间,提取总RNA,运用RT-PCR技术检测Pim-3基因表达变化；合成针对TNF-α受体1和受体2特异的干扰片段,运用脂质体转染血管内皮细胞,敲低目的基因的表达水平,在此基础上观察TNF-a对Pim-3基因表达的影响；运用TNFR1中和抗体阻断TNF-α的受体1信号,并观察TNF-α对Pim-3基因表达的影响。运用放线菌素D阻断细胞mRNA合成,观察TNF-α处理后Pim-3基因mRNA稳定性的大小。运用细胞刮擦损伤实验观察内皮细胞丝状伪足形成能力；运用基质胶皮下植入实验研究在体条件下内皮细胞芽生能力。[结果](1)肿瘤坏死因子-α能够剂量依赖性促进血管内皮细胞中Pim-3mRNA表达,其对Pim-3mRNA表达的调节是瞬时性的,在1.5小时到2小时达到高峰。(2)TNF-α通过TNFR1促进血管内皮细胞中Pim-3mRNA表达,TNFR1中和抗体抑制TNF-a诱导的Pim-3mRNA表达。(3)PI3K、MAPK、ERK、NFκB、JNK信号通路阻断剂能不同程度增加内皮细胞Pim-3表达,而且都不能阻断TNF-a对Pim-3表达的调节作用。(4)TNF-a能够增加血管内皮细胞中Pim-3mRNA稳定性。(5)Pim-3基因沉默抑制]TNF-a诱导的培养内皮细胞丝状伪足的形成,Pim-3基因沉默抑制在体条件下得血管内皮细胞芽生。(6)Pim-3基因沉默降低内皮细胞中eNOS基因含量。[结论]血管内皮细胞中的丝/苏氨酸蛋白激酶Pim-3是TNF-α的靶基因,TNFR1介导了TNF-a对Pim-3的mRNA稳定性调节作用,Pim-3可能是炎症性血管生成过程中的重要信号分子。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
血管芽生论文参考文献
[1].田超,周梁,刘兆国,朱智杰,王爱云.DLL4/Notch信号通路在肿瘤血管芽生过程中作用研究进展[C].中华中医药学会中药实验药理分会2012年学术年会论文摘要汇编.2012
[2].杨汉东.丝/苏氨酸蛋白激酶Pim-3被肿瘤坏死因子-α调节并促进血管内皮细胞芽生[D].武汉大学.2012