IP6通过线粒体通路诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡作用研究

论文摘要

目的：研究IP6（Inositol Hexaphosphate;肌醇六磷酸）对人肝癌细胞系HepG2的诱导凋亡作用,探讨Bel-2、Bax、Caspase-3及cyt-c参与的线粒体通路在IP6诱导HepG2细胞凋亡中的作用机制,为IP。抗肿瘤作用的应用提供理论支持。方法：将不同浓度的IP。作用于体外培养的人肝癌HepG2细胞24小时,并进行以下实验研究：1透射电镜法观察IP。作用前后HepG2细胞的形态学变化；2应用Hoechst 33258荧光染色法观察IP。作用前后HepG2细胞凋亡情况；3应用流式细胞仪检测IP。作用前后HepG2细胞线粒体膜电势的变化；4免疫细胞化学法检测IP。对HepG2细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响；5 RT-PCR法检测IP。作用前后HepG2细胞内Caspase-3 mRNA的表达变化；6 Western Blot法检测IP。作用HepG2细胞前后凋亡相关蛋白Cyt-c的表达变化。结果：1透射电镜下观察发现,与对照组相比,IP6作用组HepG2细胞出现凋亡现象,发生染色体固缩,电子密度增高等形态学改变；2荧光显微镜下观察发现,HepG2细胞经不同剂量IP。作用后,细胞数量变少,排列稀疏,可观察到凋亡细胞的典型形态学变化；3流式细胞仪检测结果显示,与对照组相比,各IP6作用组对HepG2细胞的线粒体膜电势值均有降低（F=14802.610,q=101.531-209.237,p<0.05）,并且高浓度IP6对HepG2细胞的线粒体膜电势的影响比低浓度组明显,具有明显的剂量依赖关系（q=22.344-107.706,p<0.05）；4免疫细胞化学法实验结果显示,不同浓度IP6作用HepG2细胞后,与对照组比,各浓度IP。组均有效抑制Bcl-2的表达（F=110.21,q=5.88-16.92,p<0.05）,并且随着剂量的增大,各IP。组Bcl-2的表达逐渐降低（q=4.45-11.04,p<0.05）；相反,与对照组相比,各IP6组均能上调Bax蛋白的表达（F=30.474,q=3.406-9.103,p<0.05）,并且随着作用浓度的增加,各IP6组Bax的表达逐渐升高（q=3.23-5.22,p<0.05）；5 RT-PCR法实验结果显示,与对照组相比,各IP。组作用HepG2细胞后Caspase-3 mRNA的表达明显增高（F=30.474,q=3.406-9.103,p<0.05）,并且随着作用浓度的增加,各IP。作用组Caspase-3 mRNA的表达逐渐升高（q=2.803-5.697,p<0.05）：6 Western Blot法实验结果表明,与对照组相比,各实验组IP6处理HepG2细胞后Cyt-c蛋白的表达上调（F=87.194,g=5.246-15.218,p<0.05）,并且随着作用浓度的增加,蛋白表达上调渐趋明显（q=4.517-9.972,p<0.05）。结论：1.IP。可诱导人肝癌系HepG2发生凋亡；2.IP6可通过线粒体通路诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡：通过下调Bcl-2及增强Bax的表达使线粒体膜电位降低,促使线粒体内的细胞色素C释放入胞浆,活化caspase-3的表达,并产生级联放大反应,以影响人肝癌HepG2细胞信号的转导,促使细胞发生凋亡

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第1章 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.2 主要仪器及设备
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 细胞培养方法
• 1.2.2 透射电镜法观察细胞凋亡情况
• 1.2.3 Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态学变化
• 1.2.4 流式细胞术检测线粒体膜电势（△Ψm）的变化
• 1.2.5 免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达变化
• 1.2.6 RT-PCR法检测Caspase-3 mRNA的表达变化
• 1.2.7 Western Blot法检测Cyt-c蛋白的表达变化
• 1.3 统计学处理方法
• 第2章 结果
• 2.1 透射电镜法观察细胞超微结构的变化
• 2.2 荧光染色法观察细胞形态学变化
• 2.3 流式细胞术检测线粒体膜电势（△Ψm）的变化
• 2.4 Bax、Bcl-2蛋白的表达变化
• 2.5 Caspase-3 mRNA的表达变化
• 2.6 Cyt-c蛋白的表达变化
• 第3章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 综述参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 附录
• 致谢