莪术油诱导人胃癌SGC-7901细胞和鼻咽癌CNE细胞凋亡的研究

论文摘要

细胞凋亡是细胞死亡形式之一,它以细胞DNA发生特异性的降解,形态上表现为核固缩、胞膜发泡和凋亡小体形成为特征,是由特定的基因调控,无明显细胞溶解的自杀过程。诸多生理及病理过程均有凋亡参与调节。用荧光显微镜及透射电镜可观察到凋亡细胞呈现为核浓缩、核碎裂、核边聚、细胞皱缩、细胞以出穿的方式形成凋亡小体等典型的凋亡形态学特征,琼脂糖电泳示DNA呈梯带。近年来随着分子肿瘤学、分子药理学的不断发展,以及对肿瘤本质的阐明,大规模、快速筛选组合化学、基因工程等先进技术的发明和应用加速了药物开发进程。抗肿瘤药物的研究与开发已进入一个崭新的时代。本研究以人胃癌SGC-7901细胞和鼻咽癌CNE细胞为研究对象,探讨莪术油诱导人胃癌SGC-7901细胞和鼻咽癌CNE细胞凋亡的作用。采用台盼蓝拒染法检测不同剂量莪术油对人胃癌SGC-7901细胞和鼻咽癌CNE细胞的增殖抑制作用。光学显微镜,荧光显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA片段化情况,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的改变,凋亡率和细胞周期分布。结果显示莪术油作用人胃癌SGC-7901细胞和鼻咽癌CNE细胞凋亡48h均呈现不同程度的凋亡特征,且有量效关系。体外培养的人鼻咽癌CNE细胞对莪术油的敏感性高于人胃癌SGC-7901细胞。莪术油作用人胃癌SGC-7901细胞和鼻咽癌CNE细胞48h诱导凋亡的最佳浓度分别为2.25μg/mL,2.2μg/mL。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 胃癌
• 1.1.1 胃癌的概述
• 1.1.2 胃癌的主要特征
• 1.1.3 胃癌治疗的研究进展
• 1.2 鼻咽癌
• 1.2.1 鼻咽癌的概述
• 1.2.2 鼻咽癌的主要特征
• 1.2.3 鼻咽癌的研究进展
• 1.3 莪术油
• 1.3.1 莪术油的概述
• 1.3.2 莪术油的药理作用
• 1.3.3 天然药物莪术研究的意义与展望
• 1.4 细胞凋亡
• 1.4.1 细胞凋亡概述
• 1.4.2 凋亡产生的3 步骤
• 1.4.3 细胞凋亡与程序化细胞死亡
• 1.4.4 基因治疗与胃癌细胞凋亡
• 1.4.5 细胞凋亡的病因学
• 1.4.6 细胞凋亡的检测方法
• 1.4.7 细胞凋亡的相关基因
• 1.4.8 细胞器与细胞凋亡
• 1.4.9 细胞凋亡的意义与应用前景
• 1.5 本实验的研究内容及意义
• 2 材料和方法
• 2.1 实验材料与仪器
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 细胞株
• 2.1.3 主要药品
• 2.1.4 主要溶液配制
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞冻存
• 2.2.2 细胞复苏
• 2.2.3 细胞培养
• 2.2.4 细胞传代
• 2.2.5 细胞收集
• 2.2.6 细胞洗涤
• 2.2.7 细胞计数
• 2.2.8 细胞生长曲线的测定
• 50)的测定'>2.2.9 台盼蓝拒染法测定莪术油对细胞细胞增殖的抑制率(IC₅₀)的测定
• 2.2.10 确定药物作用的最佳浓度
• 2.2.11 光学显微镜下观察细胞形态的变化
• 2.2.12 荧光显微镜下观察细胞核的变化
• 2.2.13 透射电镜观察细胞形态结构的变化
• 2.2.14 细胞DNA 生化特征的检测
• 2.2.15 线粒体跨膜电位的检测
• 2.2.16 流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化
• 2.2.17 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 细胞生长曲线
• 3.2 莪术油对细胞增殖的影响
• 3.2.1 莪术油对SGC-7901 细胞增殖的抑制曲线
• 3.2.2 莪术油对CNE 细胞增殖的抑制曲线
• 3.3 莪术油作用SGC-7901 细胞和CNE 细胞的中效抑制浓度IC50
• 3.4 莪术油作用SGC-7901 细胞和CNE 细胞的最佳药物浓度
• 3.5 光学显微镜下细胞形态
• 3.5.1 光学显微镜下人胃癌 SGC-7901 细胞形态
• 3.5.2 光学显微镜下人鼻咽癌 CNE 细胞形态
• 3.6 荧光显微镜下细胞形态
• 3.6.1 荧光显微镜下人胃癌SGC-7901 细胞的形态
• 3.6.2 荧光显微镜下人鼻咽癌 CNE 细胞形态
• 3.7 透射电镜下细胞的形态结构
• 3.7.1 电镜下人胃癌SGC-7901 细胞的形态结构
• 3.7.2 电镜下人鼻咽癌CNE 细胞的形态结构
• 3.8 细胞DNA 生化特征
• 3.8.1 人胃癌SGC-7901 细胞DNA 的片段化
• 3.8.2 人鼻咽癌CNE 细胞DNA 的片段化
• 3.9 线粒体跨膜电位检测
• 3.9.1 人胃癌SGC-7901 细胞ΔΨm 的变化
• 3.9.2 人鼻咽癌CNE 细胞ΔΨm 的变化
• 3.10 流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化
• 3.10.1 细胞凋亡率的变化
• 3.10.2 细胞周期的变化
• 4 讨论
• 50)'>4.1 台盼蓝拒染法测定细胞增殖抑制率及药物半数抑制浓度(IC₅₀)
• 4.1.1 莪术油对人胃癌SGC-7901 细胞的抑制作用
• 4.1.2 莪术油对人鼻咽癌CNE 细胞的抑制作用
• 4.2 莪术油诱导细胞凋亡的形态学观察
• 4.3 药物对细胞DNA 生化特征的影响
• 4.4 流式细胞术检测细胞凋亡
• 4.4.1 细胞线粒体膜电位变化
• 4.4.2 流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的分布
• 结论
• 参考文献
• 附表
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况
• 致谢