论文摘要
目的：寻找新的更加有效的方法用于肝癌的诊断是临床诊疗的迫切需求。本研究利用代谢组学方法,通过对肝硬化及肝硬化伴发肝细胞肝癌腹水标本之间代谢轮廓的分析,寻找出差异代谢标志物,并对差异代谢标志物所反映的肝硬化基础上肝细胞肝癌发生发展的分子机制进行了初步探讨。方法：利用高效液相色谱-轨道离子阱质谱联用平台分析30例肝硬化腹水标本及26例肝硬化伴发肝细胞肝癌腹水标本,随机挑选出各组病例的20%组成检测组样本用于对模型的检测,不参与后期的数据分析,余下的80%样本作为训练组用于数据分析。首先利用主成分分析法（PCA）和正交偏最小二乘分析法（OPLS）对代谢轮廓数据的变异性进行分析,构建“肝硬化组-肝硬化伴发肝细胞肝癌组”的二分类OPLS-DA模型,根据该模型的VIP值筛选出相对应的变量,提取出VIP值大于1的变量并弃除其中在VIP图和系数图上置信区间包含零的所有变量,并根据相应的S图进行进一步确证。以表示模型预测能力的参数Q2=50%和表示模型区分能力的参数R2Y=50%,作为区分模型优劣的标准,低于50%为不合格模型。代谢物的鉴定通过利用精确质量数（m/z）搜索Mass Frontier 6.0自带数据库,Medlin（www.medlin.scripps.edu）数据库,KEGG （http://www.genome.jp/kegg/ligand.html）数据库以及HMDB（http://hmdb.ca/）数据库,分析二级质谱（MS/MS）及标准品确证等步骤完成。并利用交叉验证法和独立样本检测法对本研究中的模型进行评估。结果：通过对质控样本数据分析发现,液质联用平台分析检测性能的“时间”偏移对实验结果没有产生影响。利用血清代谢轮廓数据构建的OPLS-DA模型经7倍交叉验证有很好的预测能力（Q2为79.5%）,该模型对检测组样本的预测准确性达到100%。共筛选出31个特征离子,经过数据库搜索和结构推导,24个得到了鉴别。这24个代谢物分别有21水平升高,3个水平降低。植物鞘氨醇,13-HETE等具有促进细胞凋亡作用的作用的代谢物水平升高,而抗凋亡作用的12-氧-20-二羟-白三烯B4水平降低,促进肿瘤细胞生长和肿瘤血管生成的5′-甲硫腺苷（MTA）水平升高。结论：（1）建立了利用液质联用平台进行腹水代谢组学研究的方法；（2）利用模式识别方法找到了可用于肝细胞肝癌早期诊断的潜在代谢标志物,包括13-羟二十碳四烷酸（13-HETE）、植物鞘氨醇、5′-甲硫腺苷、阿洛糖；（3）本研究发现腹水代谢物可以反应出肝硬化伴发肝癌患者细胞凋亡调控及肿瘤生长代谢方面的变化。