蛇床子素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和脂向分化的影响

论文摘要

目的：建立大鼠MSCs的体外培养体系，观察大鼠MSCs生物学特性，同时研究蛇床子的有效成分蛇床子素对MSCs增殖和脂向分化的影响，并通过探讨蛇床子素对与脂向分化重要相关的蛋白Leptin mRNA的影响，从干细胞角度深入探讨蛇床子素防治OP的作用机理。方法：1．运用全骨髓贴壁法分离培养并鉴定SD大鼠的MSCs；2．运用MTT法检测不同浓度的蛇床子素对大鼠MSCs增殖的影响，以确定最佳促进增殖添加剂量。3．用油红O染色法作脂肪细胞计数，确定蛇床子素抑制大鼠MSCs脂向分化的有效浓度剂量。4．用最佳浓度的蛇床子素干预MSCs向脂肪细胞分化，分为空白组、经典诱导组、蛇床子素干预组，用PNPP法及GPO-PAP法分别检测ALP活性和TG的含量。5．将细胞分为空白组、经典诱导组、蛇床子素干预组，运用RT-PCR的方法检测蛇床子素调控MSCs脂向分化过程中相关蛋白Leptin mRNA的影响，结果：1．MSCs分离后24 h基本贴壁，10～14 d达到融合，经过成骨、成脂诱导培养，MSCs分别表现出成骨细胞、脂肪细胞；流式细胞仪检测分离到的SD大鼠MSCs表面标志抗原CD44、CD29表达阳性；CD45及CD34表达为阴性；2．经MTT法检测蛇床子素对MSCs增殖的作用，蛇床子素浓度在1×10-5mol／L，1×10-6mol／L，1×10-7mol／L有明显促进MSCs增殖的作用，与空白组相比较有显著差异（P＜0.05），以1×10-6mol／L效果最好；3．蛇床子素具有抑制MSCs向脂肪细胞分化，蛇床子素浓度在1×10-6mol／L、1×10-7mol／L、1×10-8mol／L与经典组相比有显著差异（P＜0.05），且以1×10-7mol／L效果最好；4．细胞培养12 d后，蛇床子素干预组培养液中的ALP含量与经典诱导组、空白组之间差异均有显著性（P＜0.05），而经典诱导组与空白组间差异无显著性（P＞0.05）；5．细胞培养12 d后，经典诱导组中细胞内TG含量与蛇床子素干预组、空白组之间差异均有显著性（P＜0.05），而蛇床子素干预组与空白组间差异无显著性（P＞0.05）；6．蛇床子素对干预体系中Leptin mRNA的表达有上调作用，Leptin mRNA的表达（总体均数）：蛇床子素干预组高于经典组和经典诱导组（P＜0.05），经典诱导组和空白组之间差异无显著性。结论：1．蛇床子素能促进MSCs增殖；2．蛇床子素能够抑制成脂液诱导MSCs分化为脂肪细胞；3．蛇床子素能降低TG含量，同时能升高细胞内ALP活性；4．蛇床子素能上调细胞中Leptin mRNA的表达，从而可能抑制MSCs向脂肪细胞分化；

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 1 前言
• 1.1. MSCs 的生物学特性
• 1.2. MSCs 脂向分化与 OP 的关系
• 1.3 中药对 MSCs 脂向分化的影响
• 1.4 蛇床子的研究现状
• 1.5 研究思路及目的
• 2 实验一 MSCs 的分离、培养、纯化和鉴定
• 2.1 实验目的
• 2.2 实验材料
• 2.3 实验方法
• 2.4 结果
• 2.5 讨论
• 2.6 小结
• 3 实验二 蛇床子素对大鼠 MSCs 增殖和脂向分化的影响
• 3.1 实验目的
• 3.2 实验材料
• 3.3 实验方法
• 3.4 结果
• 3.5 讨论
• 3.6 小结
• 4 实验三 蛇床子素干预过程中对 Leptin mRNA 的影响
• 4.1 实验目的
• 4.2 实验材料
• 4.3 实验方法
• 4.4 结果
• 4.5 讨论
• 4.6 小结
• 5 结论
• 6 展望
• 参考文献
• 主要缩略语中英文对照
• 附图
• 附录
• 致谢