鲤亚目几种名优鱼的随机扩增多态性DNA分析

论文摘要

本论文对八种名优鱼（胭脂鱼科的胭脂鱼,鲤科鲃亚科的中华倒刺鲃和光倒刺鲃,裂腹鱼亚科的齐口裂腹鱼,雅罗鱼亚科的丁（鱼岁）,鲤亚科的三角鲤、岩原鲤和杂交岩原鲤）进行了随机扩增多态性DNA（RAPD）分析,根据遗传相似率和遗传距离,重建了八种鱼之间的亲缘关系,将岩原鲤和杂交岩原鲤进行了区分,并初步筛选了七种名优鱼的RAPD分子标记。 实验首先比较了四种不同的鱼类基因组DNA提取方法（组织基因组DNA抽提试剂盒法,血液基因组DNA抽提试剂盒法,组织基因组DNA的手工提取法和血液基因组DNA的手工提取法）,确定了血液基因组DNA的手工提取法为鱼类基因组DNA提取的最佳方法,并采用此方法制备了本实验所需的八种鱼的基因组DNA。接着根据RAPD特点对RAPD-PCR条件进行了优化,确定了本实验最佳的反应条件(Mg2+浓度1.5mmol/L,模板量为30ng,退火温度36℃)。在最佳反应条件下,采用OPA、OPC和OPM三组共60条10碱基随机引物对八种鱼基因组DNA进行RAPD-PCR反应,分析了实验结果,筛选了35条引物作重复实验。对重复实验的35条引物的扩增条带进行了统计,包括单个引物扩增的总条带数,单个引物单种鱼（即一个泳道）扩增的条带数,单种鱼扩增总带数,单个引物任两种鱼相同的带数以及扩增条带大小等几个方面内容。根据统计结果,计算了八种鱼之间的遗传相似率（S=2Nab/Na+Nb）和遗传距离（D=1-S）。以遗传距离D值,采用PHYLIP3.5C版本软件包中的Neighbor程序进行UPGMA聚类分析,重建了八种鱼

论文目录

• 鲤亚目几种名优鱼的随机扩增多态性DNA分析
• 中文摘要
• 英文摘要
• 引言
• 第一章 八种名优鱼的RAPD扩增
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 主要药品与试剂
• 1.3 主要实验仪器
• 1.4 鱼基因组总DNA提取方法的比较研究
• 1.5 基因组DNA的质量分析
• 1.6 RAPD的PCR扩增
• 2 结果与讨论
• 2.1 鱼基因组总DNA的提取
• 2.2 RAPD-PCR条件的优化结果
• 2.3 RAPD反应
• 2.4 部分引物的重复RAPD实验
• 第二章 RAPD数据处理与聚类分析
• 1 方法
• 1.1 RAPD扩增条带统计
• 1.2 RAPD数据处理与聚类分析
• 1.3 七种鱼的RAPD分子标记
• 2 结果与分析
• 2.1 RAPD扩增条带统计结果
• 2.2 RAPD数据处理与聚类分析
• 2.3 七种鱼的RAPD分子标记
• 第三章 讨论
• 1 鱼类基因组DNA提取方法的选择
• 2 RAPD的最佳条件和稳定性问题
• 3 RAPD技术鉴定名优鱼的可行性
• 4 实验的下一步工作
• 5 应用的可行性
• 西伯利亚鲟和鲫鱼脑型一氧化氮合酶cDNA片段克隆及序列分析
• 引言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料和试剂
• 1.2 主要实验仪器
• 1.3 总RNA提取
• 1.4 RT-PCR引物设计
• 1.5 1.5 cDNA的合成
• 1.6 PCR反应
• 1.7 目的产物的回收和纯化
• 1.8 目的片段的克隆
• 1.9 序列分析
• 2 结果
• 2.1 总RNA质量分析
• 2.2 RT-PCR扩增、克隆和测序
• 2.3 序列分析
• 3 讨论
• 参考文献
• 文献综述
• 硕士期间发表文章情况
• 致谢
• 声明