亚硒酸钠胁迫下斑点叉尾鮰脑组织差异蛋白质组研究

论文摘要

硒是动物和人必须的微量元素之一,具有抗氧化、抗应激、加强机体免疫力、抗肿瘤等重要作用。本论文以斑点叉尾鮰为研究对象,在开展亚硒酸钠对斑点叉尾鮰的急性毒性试验、半致死浓度协迫下脑组织病理观察的基础实验上开展脑组织差异蛋白质组的初步研究。第一部分开展亚硒酸钠对斑点叉尾鮰幼鱼的急性毒性试验,结果表明：试验组斑点叉尾鮰易受惊扰,身体失去平衡,或是侧游、或是仰游、或是翻滚。经统计学分析得到亚硒酸钠对鮰鱼96h半致死浓度为35.59mg/L第二部分依据急性毒性试验分析结果,取经过半致死浓度35.59mg/L浸泡96h后还存活的鱼小脑进行石蜡组织切片和电镜观察。组织切片结果表明：对照组小脑皮质颗粒层细胞排列均匀,颗粒层结构完整,呈正常的圆形；实验组小脑皮质颗粒层区域疏松、水肿,呈现空网状,颗粒细胞崩解消失,部分细胞失去正常的圆形,出现菱角,呈三角形或者不规则形状。电镜结果表明：对照组小脑皮质细胞内有丰富的细胞器,线粒体丰富,嵴板排列规整,髓鞘结构完整；实验组小脑皮质细胞质水肿,细胞质内细胞器明显减少,线粒体水肿,双层膜结构坍塌,嵴溶解消失,有的线粒体呈空泡状,仅见线粒体的轮廓。病理观察表明亚硒酸钠对斑点叉尾鮰脑组织有一定的毒性损伤。第三部分同样取经过半致死浓度35.59mg/L浸泡96h后还存活的鱼脑组织进行蛋白质组学研究。首先通过优化双向凝胶电泳各方面条件后建立一套适合于斑点叉尾鮰脑组织双向电泳体系,分析双向电泳图谱找出差异蛋白点。结果表明：对照组分离出蛋白质点1024±25个,实验组为998±20个,对照组与实验组共有9个差异表达的蛋白质点。将差异蛋白质点进行生物质谱分析鉴定,并通过对NCBInr和EST数据库检索得到9种蛋白质,其中3种蛋白质为peroxiredoxin-2、aldose reductase和carbonic anhydrase,有望作为研究斑点叉尾鮰脑组织毒性损伤后的指示蛋白质。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 斑点叉尾鮰生物学概况
• 1.2 微量元素硒的生物学功能
• 1.3 蛋白质组技术研究进展
• 1.3.1 向电泳技术
• 1.3.2 质谱技术
• 1.3.3 生物信息学
• 1.4 蛋白质组学在水产动物中的研究
• 1.4.1 国内对水产动物组织的研究
• 1.4.2 国外对水产动物组织的研究
• 1.5 重金属的毒性蛋白质组研究
• 1.6 研究意义及研究内容
• 1.6.1 研究意义
• 1.6.2 研究内容
• 2SeO₃对斑点叉尾鮰的急性毒性试验'>第二章 Na₂SeO₃对斑点叉尾鮰的急性毒性试验
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要试剂和仪器
• 2.1.3 试验方法
• 2.2 结果
• 2.2.1 斑点叉尾鮰中毒症状
• 2.2.2 急性毒性试验结果
• 2.2.3 安全浓度和各时间段半致死浓度
• 2.3 讨论
• 2SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织病理观察'>第三章 Na₂SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织病理观察
• 3.1 材料
• 3.2 主要仪器和试剂
• 3.2.1 主要试剂
• 3.2.2 主要仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 实验鱼的准备
• 3.3.2 硒含量测定
• 3.3.3 石蜡切片制作
• 3.3.4 电镜制作
• 3.4 结果
• 3.4.1 硒含量检测
• 3.4.2 脑组织的病理切片
• 3.4.3 电镜观察
• 3.5 讨论
• 2SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织石蜡切片观察'>3.5.1 Na₂SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织石蜡切片观察
• 2SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织电镜观察'>3.5.2 Na₂SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织电镜观察
• 2SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织差异蛋白质组分析'>第四章 Na₂SeO₃胁迫下鮰鱼脑组织差异蛋白质组分析
• 4.1 实验材料
• 4.2 主要仪器和试剂
• 4.2.1 主要仪器
• 4.2.2 主要试剂
• 4.3 实验设计及方法
• 4.3.1 取材
• 4.3.2 样本制备
• 4.3.3 蛋白质定量
• 4.3.4 向凝胶电泳
• 4.4 结果
• 4.4.1 蛋白质浓度测定
• 4.4.2 向凝胶电泳图谱及差异蛋白质分析
• 4.4.3 图像分析
• 4.5 讨论
• 4.5.1 蛋白质样品制备
• 4.5.2 上样量的优化
• 4.5.3 双向电泳条件优化
• 第五章 差异蛋白质质谱分析
• 5.1 主要仪器和试剂
• 5.1.1 主要仪器
• 5.1.2 主要试剂
• 5.1.3 主要试剂配制
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 挖点
• 5.2.2 脱色
• 5.2.3 酶解
• 5.2.4 萃取
• 5.2.5 点样
• 5.2.6 质谱分析
• 5.2.7 数据库检索
• 5.3 鉴定结果
• 5.4 讨论
• 5.4.1 Peroxiredoxin-2（过氧化还原酶2）
• 5.4.2 Aldose reductase（醛糖还原酶）
• 5.4.3 Carbonic anhydrase（碳酸酐酶）
• 第六章 小结与展望
• 6.1 小结
• 6.2 不足之处与展望
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间的研究成果