扁蓿豆AFLP体系的建立及在其遗传完整性检测中的应用

论文摘要

AFLP（Amplified fragment length polymorphism）是一种新型的分子标记技术,目前已广泛应用于生物遗传多样性研究、种质资源鉴定及动植物育种等领域的研究。本试验建立了适合扁蓿豆的AFLP分析体系,并首次使用AFLP分子标记对扁蓿豆（Medicago ruthenica L.）种质的遗传完整性进行检测。以期为扁蓿豆种质资源保存、扁蓿豆分子遗传图谱的构建提供理论依据。主要研究结果如下:1.建立了适合扁蓿豆的AFLP分析体系。具体内容为:模板DNA的用量范围为100ng-600ng;酶切体系中,EcoRⅠ和MseⅠ各加入3U,在37℃下酶切反应4h;加入接头后在16℃连接10-12h;预扩增体系总体积为20μl,酶切连接产物为4μl;将预扩增体系稀释20倍后用于选择性扩增。2.从64个EcoRⅠ和MseⅠ引物组合中筛选出8对条带清晰,多态性高的引物, 8对引物共扩增出92个位点,其中多态性位点41个,占总位点数的44.57%,每个引物组合扩增的位点数在9-14个之间。3.各个老化处理群体的AFLP分析结果显示:人工老化对扁蓿豆种子的生活力虽然产生极显著影响,但对其种质的遗传完整性变化却未产生显著影响。此表明扁蓿豆种质具有较强的遗传稳定性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 文献综述
• 1.1.1 分子标记概述
• 1.1.2 AFLP 分子标记
• 1.1.3 种质遗传完整性研究进展
• 1.2 研究目的及意义
• 2 扁蓿豆 AFLP 分析体系的探索及建立
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 扁蓿豆基因组 DNA 的提取
• 2.2.2 模板 DNA 浓度和纯度检测
• 2.2.3 AFLP 分析体系的探索
• 2.2.4 引物筛选
• 2.2.5 电泳结果处理
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 模板 DNA 的质量
• 2.3.2 扁蓿豆 AFLP 分析体系的建立
• 2.3.3 引物筛选的结果
• 3 AFLP 分析人工老化处理对扁蓿豆遗传完整性的影响
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.2.1 种子人工老化处理
• 3.2.2 室内发芽率测定
• 3.2.3 盆栽试验
• 3.2.4 基因组 DNA 提取及质量检测
• 3.2.5 AFLP 分析
• 3.2.6 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3.2.7 数据统计与分析
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 人工老化处理对扁蓿豆种子发芽的影响
• 3.3.2 8 对引物的AFLP 扩增结果
• 3.3.3 不同老化处理群体等位基因频率分析
• 3.3.4 不同老化处理群体遗传多样性分析
• 3.3.5 不同老化处理群体遗传相似性分析
• 4 讨论
• 4.1 扁蓿豆AFLP 分析体系建立的关键因素
• 4.1.1 基因组 DNA 的提取及质量
• 4.1.2 酶切连接
• 4.1.3 预扩增与选择性扩增
• 4.1.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 4.2 使用AFLP 检测扁蓿豆种质遗传完整性变化
• 4.2.1 扁蓿豆种质遗传稳定性分析
• 4.2.2 扁蓿豆种质更新发芽率分析
• 4.2.3 扁蓿豆种质耐贮性分析
• 4.2.4 展望
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介