论文摘要
本文首先利用肺炎克雷伯菌Ⅰ型菌毛甘露糖敏感血凝特性和Ⅲ型菌毛甘露糖抵抗血凝特性对5株临床分离鸡源肺炎克雷伯菌的菌毛类型进行初步鉴定;随后利用PCR扩增肺炎克雷伯菌Ⅰ型和Ⅲ型菌毛主要结构亚单位基因（fimA/mrkA）的方法对5株菌菌毛类型作进一步鉴定,结果表明,5株菌皆表达Ⅲ型菌毛;建立了肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛的PCR检测方法,检测基因组DNA的灵敏度为16.8fg/μL,检测细菌培养物的灵敏度为3.7×102CFU/mL,PCR特异性反应结果显示参考菌株均为阴性。然后,较全面地优化了Ⅲ型菌毛体外表达条件。经热浴法、硫酸铵沉淀和蔗糖梯度离心提取纯化了Ⅲ型菌毛抗原,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western Blot对提纯物进行鉴定;以全菌作免疫抗原,纯化菌毛作筛选用抗原,利用单克隆抗体技术建立1株能稳定分泌肺炎克雷伯菌Ⅲ型菌毛单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E10,经扩大培养后,制备单抗腹水,对所得单克隆抗体的效价、亲和力、特异性等进行了鉴定,结果表明:制备的单克隆抗体为lgG1亚型;腹水效价为1:256 000;纯化腹水中抗体含量为3.27mg/mL;单抗的相对亲和力为0.3μg/ml;特异性反应显示:与大肠埃希菌,副伤寒沙门菌,铜绿假单胞菌,产单核细胞李斯特杆菌,胸膜肺炎放线杆菌均无交叉反应。
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