前列腺癌组织中谷胱甘肽S-转移酶P1基因启动子区域甲基化序列分析

论文摘要

【背景】前列腺癌（prostare cancer,PCA）是美国男性中第二位的癌症死亡原因,并且九分之一的65岁以上的老年男性会受到该疾病的困扰。据报道,2001美国有200,000的被诊断为前列腺癌,31,500患者死于前列腺癌。近年来,我国前列腺癌的发病率也呈逐渐上升趋势。对于早期发现的局灶性前列腺癌的患者进行前列腺癌根治手术是最好的治疗手段,愈后理想。因此,前列腺癌检测的目标就在于能够在疾病的早期和可以达到根治的阶段明确诊断。当前,前列腺癌主要依靠直肠指诊和血清前列腺特异性抗原（prostate-specific antigen,PSA）水平进行筛选,在前列腺癌的患者中,PSA往往呈现较高的水平,最后依靠经直肠穿刺活检明确诊断。但是,PSA的低特异性常常出现大量的假阳性和假阴性结果,影响临床判断。所以,探索一个新的前列腺癌特异性的诊断指标是亟待解决的课题。抑癌基因启动子区域CPG岛的超甲基化导致基因表达缺失,这是人类肿瘤的一个普遍特点。谷胱甘肽转移酶（Glutathione S-transferaseS,GSTs）是一组能够通过催化细胞内外源性化学物质和致癌物与谷胱甘肽进行结合,从而达到细胞内解毒保护组织细胞作用的家族酶系。其中,GSTP1是其中分布最为广泛,且在癌症中研究最为深入的一种。国外报道,在前列腺癌组织中GSTP1基因5’端启动子编码区出现了超甲基化的表现,甲基化发生频率高达90～96%。然而,国内的一项研究报道,在50例前列腺癌组织中GSTP1基因非甲基化发生率为86%,并没有发现甲基化。这与国外的研究截然不同,因此,对我国人群中前列腺癌患者进行GSTP1基因启动子区域甲基化状态分析是值得我们深入研究的。【目的】探讨中国人群前列腺癌、前列腺增生以及正常前列腺组织中GSTP1基因启动子区域CPG岛的甲基化状态,探索前列腺癌早期诊断的检测方法。【方法】收集31例前列腺癌组织（PCa）、18例前列腺增生组织（BPH）以及3例正常前列腺组织（NP）。提取组织DNA后进行重亚硫酸氢盐转化,通过巢式甲基化特异性聚合酶连反应（nest methylatiln-specific PCR,NMSP）方法检测GSTP1基因启动子区域进行甲基化状态,并应用T-载体连接,大肠杆菌感态细胞对目的基因克隆测序。【结果】PCA、BPH和NP组GSTP1基因启动子区域甲基化的发生率分别为83%,0%和0%。19条PCA基因序列的（19×38）722个CG位点,28条BPH基因序列的（28×38）1064个CG位点以及29条NP基因序列的（29×38）1102个CG位点的甲基化率分别为96%,34%和37%。卡方检验分析,PCA组和BPH、NP组GSTP1基因启动子区域CG位点的甲基化率具有显著的统计学意义（P＜0.01）,BPH组和NP组GSTP1基因启动子区域CG位点的甲基化率没有统计学差异（P＞0.05）。【结论】巢式甲基化特异性PCR是一种高灵敏度、高特异性的甲基化检测方法。和前列腺增生和正常前列腺比较在前列腺癌中GSTP1基因启动子区域呈现出超甲基化的状态。GSTP1基因CPG岛甲基化的检测,有望成为前列腺癌的早期诊断标志。

论文目录

• 中文摘要
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• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
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• 文献综述
• 参考文献
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• 致谢